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細胞因子的檢測-公衛(wèi)助理醫(yī)師技能考試

2015-03-17 17:38 醫(yī)學教育網(wǎng)
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細胞因子的檢測是公衛(wèi)助理醫(yī)師實踐技能第三站會涉及到的知識點,醫(yī)學教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)資料,以便大家更好地復(fù)習。

細胞因子檢測是判斷機體免疫功能的一個重要指標,因而具有重要的實驗室研究價值,同時還可能在臨床上有諸多實用價值、包括許多疾病的診斷、病程觀察、醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理療效判斷及細胞因子治療監(jiān)測等。但是,由于細胞因子在體內(nèi)的含量甚微,給細胞因子的檢測帶來困維。目前細胞因子的主要檢測方法包括:

(一)依賴性細胞株

一些腫瘤細胞株必須依賴于細胞因子方能在體外增殖,如DTLL細胞株依賴IL-2;FDC-PL細胞株依賴于小鼠IL-3;TF-1細胞株依賴于人IL-3和人GM-CSF,因而可利用這些依賴細胞株檢測相應(yīng)的細胞因子。這種方法敏感性高,特異性也不錯,但可異的是并非所有細胞因都能找到相應(yīng)的細胞株,因而限制了它的應(yīng)用。

(二)功能檢測

利用一些細胞因子的功能特性,可建立相應(yīng)的活性測定方法,如干擾素的抑制病毒感染效應(yīng),腫瘤壞死因子對L929細胞的殺傷作用等。這樣的方法敏感性高,但特異性不夠,容易受一些擾因素的影響。

(三)免疫測定

利用抗原抗體反應(yīng)的原理,制備出抗細胞因子的單克隆抗體或多克隆抗體,可進行細胞因子的免疫檢測。這種方法的優(yōu)點是特異性強、操作簡便,缺點是靈敏度不夠,且不能代表活性測定的結(jié)果。從目前的國際發(fā)展趨勢來看,已研制出了高靈敏度、特異性高、高度配套的細胞檢測試劑盒,其應(yīng)用范圍正在擴大,有良好的發(fā)展前景。

(四)功能測定與抗體抑制

為解決功能定特異性不夠,免疫測定靈敏度不夠的問題,可將兩種方法結(jié)合起來,利用各自的長處,有可能得到較為可靠的結(jié)果。在這一方法中,所用的抗細胞因子抗體必須是具有中和活性的抗體。

(五)分子雜交技術(shù)

利用分子生物學技術(shù),制備出細胞因子的基因探針,可通過分子雜交技術(shù)檢測細胞內(nèi)細胞因子mRNA的表達,這是一種高度敏感和高度特異的檢測技術(shù),目前在實驗室研究中使用較廣,其缺點是操作較為繁瑣,測定結(jié)果只能代表細胞因子基因的表達,而不能代表活性細胞因子的水平。

(六)多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)

PCR(polymerasechain reation)技術(shù)是一種高效的基因體外擴增技術(shù),目前PCR技術(shù)已用于細胞因子的檢測中,首先將細胞因子產(chǎn)生細胞的RNA提取出來,再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以cDNA為模板,在細胞因子引物的引導下,即可進行PCR擴增。這種技術(shù)是迄今最敏感的細胞因子檢測技術(shù),操作也較簡便,缺點與分子雜交技術(shù)類似,并且不容易對細胞因子表達水平進行定量。

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