2012年公衛(wèi)醫(yī)師考試在即,醫(yī)學教育網(wǎng)收集整理了2012公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試大綱中基礎知識的相關內(nèi)容,供各位考生參考。
在測定一個蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)以前,首先必須保證被測蛋白質(zhì)的純度,使結(jié)果準確可靠。其次要了解它的分子量和亞基數(shù),按照其亞基數(shù)將蛋白質(zhì)分成幾個多肽鏈。
蛋白質(zhì)分子多肽鏈的連接有共價結(jié)合和非共價結(jié)合兩種。要拆開以共價結(jié)合的-S-S-連接的多肽鏈,必須采用的化學處理方法常有:
①過甲酸氧化
用氧化劑過甲酸斷裂-S-S-.這個反應一般在0℃下進行2小時左右,兩個S就全部能轉(zhuǎn)變成磺酸基,這樣被氧化的半胱氨酸稱為磺基丙氨酸。
如果蛋白質(zhì)分子中同時存在半胱胺酸,那么也會被氧化成磺基丙氨酸。此外甲硫氨酸和色氨酸也可被氧化,從而增加分析的復雜性。
②巰基乙醇還原
利用還原劑巰基乙醇亦可使蛋白質(zhì)的-S-S-斷裂。當高濃度的巰基乙醇在pH8?條件下室溫保溫幾小時后,可以使-S-S-定量還原為桽H.與此同時反應系統(tǒng)中還需要有8摩爾脲或6摩爾鹽酸胍使蛋白質(zhì)變性,多肽鏈松散成為無規(guī)則的構(gòu)型,此時還原劑就可作用于-S-S-.此反應是可逆的,因此要使反應完全醫(yī)`學教育網(wǎng)整理,疏基乙醇的濃度必需在0.1-0.5摩爾。
③Cleland試劑的還原作用
Cleland′s指出二硫赤蘇糖醇(dithioerythriotol)及二硫蘇糖醇(dithiothriotol)在氧化還原能力上是比較強的試劑,只要0.01摩爾就能使蛋白質(zhì)的-S-S-還原,反應基本與疏基乙醇相似,且在許多球蛋白反應中,可以不用變性劑。
Cleland試劑首先與蛋白質(zhì)-S-S-形成中間物,反應終了,還原劑被氧化形成一個穩(wěn)定的六環(huán)化合物,蛋白質(zhì)則被還原。
還原蛋白不穩(wěn)定,SH基極易氧化重新生成-S-S-鍵。穩(wěn)定SH基的方法有:
(A)烷基化試劑使SH基轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的硫醚衍生物醫(yī)`學教育網(wǎng)整理。
如果碘代乙酰胺代替碘代乙酸,其產(chǎn)物S羧氨甲基衍生物不帶電荷,磺代乙酸也可與組氨酸、蛋氨酸和賴氨酸發(fā)生反應,但反應條件不同,可通過各種pH及反應時間進行控制。
(B)氨乙基化
蛋白質(zhì)分子的幾條肽鏈若以非共價健結(jié)合,則用尿素、鹽酸胍等變性劑即可拆開。蛋白質(zhì)的多肽鏈被拆開后,將它分離純化,一般多用凝膠過濾、離子交換、電泳等方法,茲不贅述。
分離純化后的每條肽鏈還要進一步分析其末端。