醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了酶活性測定常見方法如下,請各位考生仔細(xì)查看。
(1)定時(shí)法:(兩點(diǎn)法)
通過測定酶反應(yīng)開始后某一時(shí)間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時(shí)間。
酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時(shí)間,通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理沉淀劑等,使反應(yīng)完全停止(也叫中止反應(yīng)法)。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。
該法最基本的一點(diǎn)是停止反應(yīng)后才測定底物或物的變化。
優(yōu)點(diǎn):簡單易行,對試劑要求不高。
缺點(diǎn):難保證測定結(jié)果的真實(shí)性。
難以確定反應(yīng)時(shí)間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時(shí)間的延續(xù),酶變性失活加速。
(2)連續(xù)監(jiān)測法:
又稱為動力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。
在酶反應(yīng)過程中,用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變,通過計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。
連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù),可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計(jì)算酶活力。
因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時(shí)法更準(zhǔn)確。
實(shí)際工作中,采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理應(yīng)用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。
(3)平衡法:
通過測定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點(diǎn)法。
歡迎關(guān)注醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)!醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)提供檢驗(yàn)技士、檢驗(yàn)技師、檢驗(yàn)主管技師高頻考點(diǎn)、備考技巧、政策動態(tài)!