用品及準(zhǔn)備

　　Rh試劑血清：抗C、抗E、抗D、抗c、抗e；pH5.5磷酸鹽緩沖液；蛋白水解酶（如波蘿酶）；37℃水浴箱；待檢者紅細(xì)胞，各型陰、陽性對照紅細(xì)胞。其他材料同ABO血型鑒定。

　　方法及內(nèi)容

　　1.蛋白水解酶法（包括菠蘿酶、木瓜酶、無花果酶、胰蛋白酶等） 以菠蘿酶介質(zhì)法為例：

　　（1）取菠蘿酶1g，加pH5.5磷酸鹽緩沖液100ml，充分振搖混勻，置37℃水浴箱30min，離心沉淀后取上清液即1％菠蘿酶液。放置4℃冰箱貯存。

　　（2）待檢者紅細(xì)胞及對照紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌1次（有溶血的紅細(xì)胞除外），配成5％紅細(xì)胞懸液。

　?。?）取小試管15支，分3排，每排試管按C、c、D、E、e順序標(biāo)記。

　?。?）每排第1管加抗C血清，第2管加抗c血清，第3管加抗D血清，第4管加抗E血清，第5管加抗e血清各1滴。

　?。?）第1排各管加待檢者紅細(xì)胞懸液各1滴，第2排加陽性對照紅細(xì)胞，第3排加陰性對照紅細(xì)胞。

　?。?）每排各管加1％菠蘿酶液1滴。

　　（7）混勻，置入37℃水浴箱中1h觀察結(jié)果，若無凝集，應(yīng)查找原因。

　　結(jié)果判讀：

　?。?）傾斜試管肉眼觀察，先看陽性對照管應(yīng)凝集，陰性對照管不凝集，再看待檢者的試管有凝集者為陽性，無凝集者為陰性。如肉眼觀察有疑問者再做鏡檢。

　?。?）分別記錄，陽性或陰性。

　?。?）抗RhD陰性者，應(yīng)作間接抗人球蛋白試驗(yàn)，以免遺漏Du型。

　　附注：凡檢查出體內(nèi)有Rh抗體者，應(yīng)發(fā)給Rh血型卡。需要時，一方面動員捐出血液，另-方面須提高警惕，以免接受不相合的血液而發(fā)生意外。

　　2.鹽水介質(zhì)法：

　?。?）試管法  ①取小試管3支，1支注明抗D，另1支注明陽性對照，最后1支注明陰性對照；②將室溫鹽水反應(yīng)活性的抗D血清各1滴加入上述試管內(nèi)；③抗D試管中加入1滴5％待檢者紅細(xì)胞（鹽水、血清）懸液，陽性對照及陰性對照試管中分別加入相應(yīng)的陽性紅細(xì)胞及陰性紅細(xì)胞懸液1滴；④輕輕混勻，于3000r/min離心15s；⑤取出輕輕擺動觀察有無凝集。

　　結(jié)果判讀：抗D試管中出現(xiàn)凝集，而陰性對照試管不凝集，陽性對照試管凝集，待檢者為陽性；抗D管和陰性對照管均不凝集，陽性對照試管凝集，待檢者為陰性。

　?。?）平板法  ①取潔凈平板1塊，用記號筆劃出反應(yīng)小格，在左側(cè)注明抗D，中間段注明陰性對照，右側(cè)注明陽性對照；②將室溫鹽水反應(yīng)的抗D血清各1滴加入上述小格內(nèi)；③抗D小格內(nèi)加入待檢者5％紅細(xì)胞懸液1滴，陽性對照小格內(nèi)加入陽性對照紅細(xì)胞懸液1滴，陰性對照小格加入陰性對照紅細(xì)胞懸液1滴；④用干凈玻棒攪拌紅細(xì)胞懸液和試劑血清充分混合；⑤連續(xù)輕輕傾斜轉(zhuǎn)動平板，一般在2min內(nèi)觀察結(jié)果，或按試劑說明書規(guī)定的時間觀察結(jié)果。

　　結(jié)果判讀：同試管法。