用品及準備

　　材料 ①50μl加樣器；②250μl加樣器；③微量反應(yīng)板；④倒置顯微鏡；⑤醫(yī)用液體石蠟油；⑥尼龍纖維棉和聚乙稀塑料管（管徑6mm，長160mm）。

　　試劑

　　①抗血清。

　　②兔補體，無天然細胞毒性，效價合格的混合兔血清。

　?、?%伊紅-Y溶液。

　?、?2%福馬林（pH7.0～7.4）。

　?、輰φ战M：陽性對照，用兔抗人淋巴細胞血清和抗B淋巴細胞血清；陰性對照，滅活正常人AB型混合血清。

　?、蘖馨图毎蛛x液（比重1.077±0.02）。

　?、逪anks液（pH6.8～7.4）。

　?、?0%小牛血清-RPM1640培養(yǎng)液。

　?、崃馨图毎礈煲汉土馨图毎４嬉?。

　　方法及內(nèi)容

　?。?）向Terasaki反應(yīng)板的每孔加10μl液體石蠟油。

　?。?）每反應(yīng)板最后兩孔分別加陽性和陰性對照血清，其余每孔加已知或待檢血清1μl.

　　（3）每孔加的淋巴細胞懸液或B淋巴細胞懸液1μl，并輕輕搖動，使其與抗血清完全混勻。

　?。?）室溫（20℃±2℃）培養(yǎng)30min，B細胞置于37℃溫育箱1h。

　?。?）每孔加兔補體5μl，充分混勻，室溫培養(yǎng)1h，B細胞2h。

　?。?）每孔加入5％伊紅Y3μl，作用1～3min。

　　（7）每孔加入12％福馬林8μl，室溫靜置1～2h或4℃冰箱過夜，置顯微鏡下觀察結(jié)果。

　　注意事項

　　對淋巴細胞毒試驗方法有影響的因素很多，所以一般需做多個復(fù)本。

　?。?）淋巴細胞：①純度：沾染的顆粒細胞可吸收抗體，紅細胞及血小板可使計數(shù)時間減慢，而引起計數(shù)誤差。②濃度：細胞濃度過低，無法計數(shù)，其準確性大大下降，細胞濃度大，造成淋巴細胞集聚成團，影響結(jié)果。③pH值：中性為宜，過酸影響細胞致敏，過堿易造成假陽性。

　?。?）抗血清：細胞溶解和抗血清效價低也是引起計數(shù)誤差的常見原因。

　?。?）加入補體要充足，以克服抗補體因子。

　?。?）染料：離心除去沉淀物與雜質(zhì)。

　?。?）控制培養(yǎng)溫度與時間。