吞噬細胞功能檢測技術

吞噬細胞功能檢測技術

體內(nèi)具有吞噬功能的細胞群稱為吞噬細胞，按其形態(tài)的大小分兩類：一類為大吞噬細胞即單核一吞噬細胞系統(tǒng)（MPS），包括血液中的大單核細胞及其進入各種組織后發(fā)育而成的巨噬細胞及樹突狀細胞等；另一類為小吞噬細胞，亦即中性粒細胞。

大吞噬細胞除能非特異性地吞噬殺滅病原體、衰老病殘和突變的細胞外，還在特異性免疫形成過程中，參與抗原識別和遞呈，生成多種細胞因子，參與遲發(fā)型**反應和多種自身免疫性疾病的病理損傷。小吞噬細胞以吞噬功能為主，發(fā)揮非特異性免疫防疫作用并參與機體的免疫應答炎癥損傷等。吞噬細胞的吞噬活動大體分為趨化、吞噬和胞內(nèi)殺滅作用三個階段，據(jù)此建立相應的檢測方法。

一、中性粒細胞功能檢測

（一）趨化功能檢測

1.原理　中性粒細胞在趨化因子如微生物的細胞成分及其代謝產(chǎn)物、補體活性片段（C5a、C3a）、某些細胞因子等作用下產(chǎn)生趨化運動，其趨化運動強度可反映中性粒細胞的趨化功能。

2.方法學

（1）濾膜滲透法（Boyden小室法）

（2）瓊脂糖平板法

（二）吞噬和殺菌功能測定

1.顯微鏡檢查法　將白細胞與葡萄球菌或白色念珠菌懸液混合溫育，涂片，固定，堿性亞甲藍液染色。在油鏡下觀察靶細胞對細菌的吞噬情況，計數(shù)吞噬細菌和未吞噬細菌的白細胞數(shù)。對有吞噬作用的白細胞，應同時記錄所吞噬的細菌數(shù)。

2.溶菌法　將白細胞懸液與經(jīng)新鮮人血清調(diào)理過的細菌（大腸桿菌或金黃色葡萄球菌）按一定比例混合，溫育。每隔一定時間取定量培養(yǎng)物，稀釋后接種固體平板培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)18小時后，計數(shù)生長菌落數(shù)，以了解中性粒細胞的殺菌能力。

3.NBT還原試驗

二、巨噬細胞功能檢測

人噬細胞一般從外周血或經(jīng)斑蝥敷貼形成的皮泡液中獲取，也可從肺泡灌洗液或患者腹膜透析液中分離。實驗室用于基礎研究，探討巨噬細胞與疾病的關系和篩檢免疫增強藥物等情況下常用小鼠腹腔巨噬細胞。巨噬細胞功能的檢測方法如下：

（一）炭粒廓清試驗

（二）吞噬功能檢測巨噬細胞對顆粒性抗原物質具有很強的吞噬功能，常用雞紅細胞（CRBC）、白色念珠菌、酵母細胞等作為吞噬顆粒，用斑蝥敷貼法收集人巨噬細胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細胞。將巨噬細胞與雞紅細胞懸液在體外混合，溫育，涂片，染色，油鏡下觀察、計數(shù)，通過計算吞噬率和吞噬指數(shù)來反映巨噬細胞的吞噬功能，并通過觀察雞紅細胞的消化程度，判斷巨噬細胞消化功能。

（三）巨噬細胞溶酶體酶的測定

巨噬細胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶和溶菌酶等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的指標之一。

1.酸性磷酸酶的測定

2.非特異性酯酶的測定

（四）細胞毒作用測定

（五）巨噬細胞促凝血活性測定