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血紅蛋白測定

血紅蛋白測定

(一)檢測原理血液中血紅蛋白以各種形式存在,包括:氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白(Hi)或其他衍生物。采用比色法測定,包括:氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白(SDS)測定法、疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)法、堿羥血紅蛋白法、溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血紅蛋白測定法等。

1.HiCN測定法原理:血液中除硫化血紅蛋白(SHb)外的各種Hb均可被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白,再和CN一結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復(fù)合物-氰化高鐵血紅蛋白,其在540nm處有一吸收峰,用分光光度計(jì)測定該處的吸光度,經(jīng)換算即可得到每升血液中的血紅蛋白濃度,或通過制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線查得血紅蛋白濃度。

2.SDS測定法原理:血液中除SHb外的各種Hb均可與低濃度SDS作用,生成SDS-Hb棕紅色化合物,其吸收曲線波峰在538nm,波谷在500nm,肩峰在560nm,用分光光度計(jì)測定波峰處吸光度,經(jīng)換算可得到每升血液中的血紅蛋白濃度。

(二)方法學(xué)評價(jià)

1.HiCN法:1966年被ICSH推薦為參考方法。該法具有操作簡單、顯色快、結(jié)果穩(wěn)定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點(diǎn)。其致命的弱點(diǎn)是氰化鉀(KCN)試劑有劇毒,使用管理不當(dāng)可造成公害。

2.SDS測定法:該法具有操作簡單、呈色穩(wěn)定、準(zhǔn)確性和精確性符合要求、無公害等優(yōu)點(diǎn)。但由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn),不能直接用吸光度計(jì)算Hb濃度,而且SDS試劑的質(zhì)量差異較大會(huì)影響檢測結(jié)果。

3.HiN3測定法:該法優(yōu)點(diǎn)與HiCN測定法相似,最大吸收峰在542nm,顯色快,結(jié)果穩(wěn)定,試劑毒性僅為HiCN測定法的1/7,但仍存在公害問題。

4.堿羥血紅蛋白(AHD575)測定法:該法試劑簡單,呈色穩(wěn)定,無公害,吸收峰在575nm,可用氯化血紅素作為標(biāo)準(zhǔn)品。但儀器多采用540nm左右濾光板,限制了此法使用。

5.CTAB血紅蛋白測定法該法試劑溶血性強(qiáng)又不破壞白細(xì)胞,適用于儀器上自動(dòng)檢測Hb和白細(xì)胞。缺點(diǎn)是測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度不佳。

6.多參數(shù)血細(xì)胞分析儀:優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、快速,同時(shí)可獲得多項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù),血紅蛋白測定原理與手工法相似,儀器法測定精度(CV)約為l%。

(三)質(zhì)量控制

1.樣本異常血漿蛋白質(zhì)、高脂血癥、白細(xì)胞數(shù)超過30×109/L、脂滴等可產(chǎn)生濁度,干擾Hb測定。

2.采血部位:部位不同,結(jié)果不同,靜脈血比毛細(xì)血管血低10%~15%。

3.結(jié)果分析:測定值假性增高的原因是稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)、紅細(xì)胞溶解不當(dāng)、血漿中脂質(zhì)或蛋白質(zhì)量增加。

4.HiCN參考液:是制備標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算K值、校準(zhǔn)儀器和其他測定方法的重要物質(zhì)。

ICSH公布了制備方法和規(guī)格,我國HiCN部級參考品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為:

(1)圖形掃描波峰(540±1)nm,波谷502~504nm。

(2)Aλ540nm/Aλ504nm=1.590~1.630。

(3)Aλ750nm≤0.002.

(4)無菌試驗(yàn):普通培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)陰性。

(5)精密度:隨機(jī)抽樣10支測定,CV≤0.5%。

(6)準(zhǔn)確度:以WH0的HiCN參考品為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定,測定值與標(biāo)示值之差≤±O.5%。

(7)穩(wěn)定性:3年內(nèi)不變質(zhì),測定值不變。

(8)分裝于棕色安瓿內(nèi),每支不少于10ml。

(9)標(biāo)簽應(yīng)寫明產(chǎn)品名稱、批號、含量、有效期、生產(chǎn)日期、貯存法等。

5.質(zhì)控物:常用質(zhì)控物有:ACD抗凝全血、進(jìn)口全血質(zhì)控物、醛化半固定紅細(xì)胞、溶血液和凍干全血等。

(四)參考值:成年:男性120~170g/L;女性:110~150g/L。新生兒:170~200g/L。老年(70歲以上):男性94.2~122.2g/L;女性86.5~111.8g/L。

(五)臨床意義

1.生理性變化

(1)年齡:隨年齡增長,Hb可增高或減低,和紅細(xì)胞變化相似。

(2)時(shí)間:紅細(xì)胞和血紅蛋白量有日內(nèi)波動(dòng),上午7時(shí)達(dá)高峰,隨后下降。

2.病理性變化:血紅蛋白測定臨床意義和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相似,但在貧血程度的判斷優(yōu)于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。需注意的是:

(1)某些疾病,血紅蛋白和紅細(xì)胞濃度不一定能正確反映全身紅細(xì)胞的總?cè)萘俊H绱罅渴а獣r(shí),在補(bǔ)充液體前,雖循環(huán)血容量縮小,但血液濃度很少變化,從血紅蛋白濃度來看,很難反映出存在貧血。如水潴留時(shí),血漿容量增大,即使紅細(xì)胞容量正常,但血液濃度減低,從血紅蛋白濃度來看,已存在貧血,反之,失水時(shí),血漿容量縮小,即使血液濃度增高,但紅細(xì)胞容量減少,從血紅蛋白濃度來看,貧血不明顯。

(2)發(fā)生大細(xì)胞性貧血或小細(xì)胞低色素性貧血時(shí),紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與血紅蛋白濃度不成比例。大細(xì)胞性貧血的血紅蛋白濃度相對偏高,小細(xì)胞低色素貧血的血紅蛋白減低,但紅細(xì)胞計(jì)數(shù)可正常。

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