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雜質(zhì)-去除方法

2019-08-29 14:51 醫(yī)學教育網(wǎng)
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距離2019年考試越來越近了,醫(yī)學教育網(wǎng)搜集整理了“雜質(zhì)-去除方法”的內(nèi)容,希望可以幫助考生順利備考。

酶提取液中常含有雜蛋白、多糖、脂類及核酸等雜質(zhì),可用下述方法去除:

調(diào)PH和加熱法:利用蛋白質(zhì)對酸、堿和熱變性方面性質(zhì)的差異,可去除非活性雜蛋白。如制備脂肪酶時,在pH3、4時以400C溫度加熱150min,淀粉酶活力可喪失90%而被除去,而脂肪酶活力仍保持80%以上。

蛋白質(zhì)表面變性法:蛋白質(zhì)表面變性后其性質(zhì)有所不同,借以去除雜蛋白。如制備過氧化氫酶時,加入氯仿和乙醇進行振蕩可以將雜蛋白變性而去除。

蛋白質(zhì)沉淀劑法:利用醋酸鋁、利凡諾、單寧酸、離子型表面活性劑等蛋白質(zhì)沉淀劑可以去除雜蛋白及粘多糖類雜質(zhì)。使用時要注意這類試劑??梢鹈缸冃允Щ?,因此應(yīng)迅速除去。

選擇性變性法:各種蛋白質(zhì)對變性劑的穩(wěn)定性不同,可以用選擇性變性劑去除雜蛋白。如細胞色素丙對三氯醋酸較穩(wěn)定,所以在制備時可用2.5%三氯醋酸使其他雜蛋白變性使沉淀除去。

加保護劑熱變性法:酶與底物或競爭性抑制劑結(jié)合后,其穩(wěn)定性常顯著增加。所以常用它們?yōu)楸Wo劑,再用一些劇烈手段破壞雜蛋白,如用D-甲基苯甲酸為D-氨基酸氧化酶的保護劑,經(jīng)加熱除去雜蛋白,使該酶得到很好的提純。

核酸沉淀劑法:酶液中的核酸類雜質(zhì),可以用氯化錳、魚精蛋白硫酸鹽等沉淀劑使其沉淀而除去。必要時,也可用核糖核酶將核酸降解后除去。

以上是醫(yī)學教育網(wǎng)小編整理的“雜質(zhì)-去除方法”相關(guān)內(nèi)容,想了解更多考試知識,請持續(xù)關(guān)注醫(yī)學教育網(wǎng)。

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