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免疫電泳技術(shù)知識(shí)總結(jié)-檢驗(yàn)主管技師輔導(dǎo)

2015-09-08 13:46 來(lái)源:
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免疫電泳技術(shù)是檢驗(yàn)主管技師考試要涉及的知識(shí)點(diǎn),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)知識(shí)點(diǎn)總結(jié),希望對(duì)考生有幫助!

一、對(duì)流免疫電泳

對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)是以瓊脂或瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的一種快速醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理,敏感的電泳技術(shù)。既可用已知抗原檢測(cè)抗體,又可用已知抗體檢測(cè)抗原。反應(yīng)結(jié)果可信度高,適用范圍廣。以本法為基礎(chǔ)改進(jìn)的技術(shù)有酶標(biāo)記抗原對(duì)流免疫電泳和放射對(duì)流免疫電泳自顯影等技術(shù)。二者克服了電泳技術(shù)本身不夠靈敏的弱點(diǎn)。

二、火箭免疫電泳

(1)原理:火箭免疫電泳是將單向免疫擴(kuò)散和電泳相結(jié)合的技術(shù)??乖陔妶?chǎng)作用下,在含有適量抗體的瓊脂糖凝膠中向正極泳動(dòng),逐漸形成梯度濃度,在抗原抗體比例適當(dāng)時(shí)形成沉淀,隨著抗原量的減少,沉淀帶越來(lái)越窄,形成火箭峰樣沉淀,峰形高低與抗原量呈正相關(guān)醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。用已知量標(biāo)準(zhǔn)抗原作對(duì)照,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)檢測(cè)樣品沉淀峰的高度可算出待測(cè)抗原的含量。

(2)主要用途:

①抗原蛋白定量,如IgA、IgG、IgM和sIgA檢測(cè);

②C3、C4及其裂解產(chǎn)物檢測(cè);

③AFP等檢測(cè)。

三、免疫電泳

免疫電泳是將區(qū)帶電泳和免疫擴(kuò)散結(jié)合起來(lái)的一種免疫學(xué)分析法。血清標(biāo)本先經(jīng)區(qū)帶電泳將各種蛋白成分分離開(kāi),繼而用各種特異性抗血清進(jìn)行免疫擴(kuò)散,根據(jù)M蛋白在免疫電泳中所形成的特殊沉淀弧,觀察其電泳轉(zhuǎn)移位置與抗原特異性,可將M蛋白的免疫球蛋白類型和其輕鏈型加以鑒定。IFP還不能完全進(jìn)行M蛋白分類時(shí),可用免疫固定電泳做補(bǔ)充鑒定醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

注意:

①Ag與Ab比例要適當(dāng);

②用游離輕鏈分析時(shí),由于其分子量小,擴(kuò)散快,故每隔10分鐘觀察一次結(jié)果;

③有時(shí)M蛋白(IgA或IgM)的四級(jí)結(jié)構(gòu)會(huì)影響輕鏈抗原決定簇與相應(yīng)抗體結(jié)合,輕鏈不易檢出,易誤診為重鏈病,因此,在血清中加入2~疏基乙醇(10μl/ml)作還原處理后,再作試驗(yàn)觀察結(jié)果。

四、免疫固定電泳

免疫固定電泳技術(shù)(IFE)是一種包括瓊脂凝膠蛋白電泳和免疫沉淀兩個(gè)過(guò)程的操作。檢測(cè)標(biāo)本可以是血清、尿液、腦脊液或其它體液。免疫固定電泳技術(shù)(IFE)已在醫(yī)學(xué)研究、法醫(yī)學(xué)、基因診斷和臨床實(shí)驗(yàn)室操作中得到了廣泛的應(yīng)用。臨床主要應(yīng)用如下疾病的診斷和療效觀察:

1、單克隆免疫球蛋白增殖?。菏且詥我豢寺〉臐{細(xì)胞過(guò)度增高為特征,常常導(dǎo)致某種免疫球蛋白或免疫球蛋白亞單位大量合成而其他正常免疫球蛋白水平下降。免疫化學(xué)方法能夠?qū)Ξ惓5鞍锥?,而電泳分析能夠確定這些蛋白質(zhì)的單克隆屬性。

2、本周氏蛋白和游離輕鏈?。罕局苁系鞍资菦](méi)有與免疫球蛋白分子中重鏈結(jié)合的單克隆κ或λ輕鏈。免疫固定電泳來(lái)確定本周氏蛋白的存在形式。輕鏈病是指僅產(chǎn)生κ或λ單克隆輕鏈,在尿中稱為本周氏蛋白的疾病,輕鏈病包括10%-15%的單克隆免疫球蛋白病,它多出現(xiàn)在IgG骨髓瘤(60%)和IgA骨髓瘤(16%)病中。

3、重鏈?。菏且悦庖咔虻鞍字劓湶糠执嬖诘膯慰寺〉鞍诪樘卣鳌?

4、多克隆免疫球蛋白?。褐饕獮?gamma;蛋白區(qū)寬的條帶,多見(jiàn)于炎癥或感染和膠原病。

5、腎臟病變的來(lái)源分析:尿免疫蛋白電泳可以很好地協(xié)助臨床判斷腎臟的主要損傷(腎小球和腎小管)及尿蛋白選擇程度的估計(jì),選擇性和非選擇性蛋白尿。指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后有價(jià)值。

五、交叉免疫電泳

用瓊脂糖作支持物,先將抗原經(jīng)電泳展開(kāi),然后在同一玻板上澆注含抗體的瓊脂糖凝膠,在后一個(gè)凝膠中進(jìn)行第二次電泳(與第一次電泳方向垂直)。這種方法實(shí)際上是在凝膠電泳后進(jìn)行免疫電擴(kuò)散。不同抗原形成互相獨(dú)立的峰狀免疫沉淀,至最適抗原/抗體比值處停止運(yùn)動(dòng),沉淀峰的高度和面積與抗原量成比例關(guān)系。用此法可進(jìn)行各種抗原的定量測(cè)定。

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