薄層掃描法是用一定波長的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜有紫外光和可見光吸收的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、檢查和含量測(cè)定的方法。薄層掃描法具有分離效能高、快速、簡便等特點(diǎn)，因而適用于中藥的分析。薄層掃描法雖然精密度不如HPLC法高，但可作為補(bǔ)充，，用于無紫外吸收，或不能用HPLC法分析的組分如人參皂甙、貝母生物堿等。醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理

　　試驗(yàn)條件的選擇

　　薄層色譜條件：原則組分應(yīng)完全分離，斑點(diǎn)對(duì)稱，均勻，不拖尾。

　　檢測(cè)方法：吸收測(cè)定法和熒光測(cè)定法兩種。在可見、紫外區(qū)有吸收的組分，可在200~800nm范圍內(nèi)采用吸收測(cè)定法測(cè)定。有熒光的組分，可選擇好激發(fā)光波長（λex）和發(fā)射波長（λem），用熒光法具有專屬性強(qiáng)、靈敏度高和線性范圍寬度等特點(diǎn)。

　　測(cè)量方法：有反射法和透射法兩種。反射法是將光束照射到薄層斑點(diǎn)上，測(cè)量反射光的強(qiáng)度；反射光靈敏度較低，

　　受薄層厚度影響較小，基線較穩(wěn)，信噪比較大，因而使用較多。透射法受薄層厚度影響較大，且玻璃對(duì)紫外光有吸收，所以實(shí)際應(yīng)用較少。

　　掃描方式：有單波長和雙波長兩種。雙波長是兩束不同波長的光，一束測(cè)量樣品稱測(cè)定波長（λS）；另一束作為對(duì)照，稱參比波長（λR）。兩束光通過斬光器交替照射到斑點(diǎn)上，以吸收度之差ΔA定量。雙波長可以消除薄層不均勻的影響，使基線變得平穩(wěn)。測(cè)定波長一般選測(cè)定組分的最大吸收波長，參比波長可選在組分無吸收的位置，若背景光譜中與λS的等吸收處，可達(dá)到排除背景干擾的目的。單波長法通常用斑點(diǎn)吸收光譜的測(cè)定。 醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理

　　掃描方式還有線性掃描和鋸齒掃描：線性掃描是用一束比斑點(diǎn)略長的光作單向掃描，掃描速度快，但斑點(diǎn)形狀不規(guī)則或濃度不均勻時(shí)誤差大，主要用于熒光測(cè)定；鋸齒掃描是用一微小的光束同時(shí)互相垂直的兩個(gè)方向進(jìn)行鋸齒狀掃描，由于光束小 （1.25mm*1.25mm），光束內(nèi)部濃度差異可以忽略不計(jì)，因而受斑點(diǎn)形狀和濃度分布的影響小。

　　散射參數(shù)SX：由于薄層對(duì)光散射，其吸收度A和濃度KX之間不服從比爾定律，而符合K-M方程，其吸收度由于散射而減小，A-KX曲線偏向橫軸，不成直線，其形狀與SX有關(guān)。為測(cè)定方便。薄層掃描儀均裝有線性化器，用于對(duì)工作曲線進(jìn)行校正，使其成為直線。因此，測(cè)定時(shí)需輸入散射參數(shù)SX值。不少薄層板的SX值已知。若未知，可根據(jù)校正結(jié)果判斷（圖）。

　　測(cè)定方法的選擇

　　外標(biāo)法：若標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)過原點(diǎn)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)，宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)校正法。測(cè)定時(shí)，供試品溶液和對(duì)照品溶液應(yīng)交叉點(diǎn)于同一薄層板上，供試品點(diǎn)樣不少于4個(gè)，對(duì)照品每一濃度不少于2個(gè)。

　　內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)法是將內(nèi)標(biāo)加入供試品溶液和對(duì)照品溶液中以其峰面積的比值作為定量依據(jù)。目前應(yīng)用較少。

　　注意事項(xiàng) 影響因素較多，測(cè)定時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：薄層厚度應(yīng)均勻，表面應(yīng)平整，最好使用預(yù)制板；點(diǎn)樣應(yīng)準(zhǔn)確，原點(diǎn)大小應(yīng)一致；噴灑顯色劑應(yīng)均勻，量適中；并用膠布加以固定。

　　本法的線性范圍較窄，應(yīng)在其線性范圍內(nèi)測(cè)定。

　　中國藥典（95版）有17種藥材和制劑用本法測(cè)定含量。

　　示例 腦得生丸中人參皂甙的含量測(cè)定。

　　精密稱取供試品2g，置索氏提取器中先用乙醚除去脂溶性雜質(zhì)，再用甲醇連續(xù)回流提取人參皂甙，揮去甲醇，殘?jiān)铀芙夂螅谜〈继崛〖兓?，正丁醇減壓回收后，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照液。吸取供試品溶液2~4μl，對(duì)照品溶液2μl和4μl分別交叉點(diǎn)于高效硅膠G薄層板上，以氯仿- 醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）5~10℃放置12小時(shí)的下層液為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，110℃加熱至斑點(diǎn)顏色清晰，取出，在薄層板上蓋同樣大小的玻璃板，用膠布固定，照薄層掃描法測(cè)定，波長：λS = 525nm，λR = 700nm，測(cè)定供試品和對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

　　本法使用兩點(diǎn)校正法，標(biāo)準(zhǔn)曲線可用計(jì)算器作線性回歸處理，也可按下式計(jì)算，因 m = a Ba故 b = （m1 - m2）/（A1 - A2）， a = m1 - bA1

　　高效液相色譜法

　　分離效能高、分析速度快，應(yīng)用范圍廣，其準(zhǔn)確度和重線性均優(yōu)于薄層掃描法，是中藥制劑含量測(cè)定的手選方法。95版一部已有12種藥材和制劑用高效液相色譜法測(cè)定含量，并有增加趨勢(shì)。

　　色譜條件的選擇

　　多用反相高效液相色譜法（RP-HPLC），及非極性的固定相，其中以十八烷基鍵合硅膠（ODS）應(yīng)用最多；使用甲醇-水或乙腈-水的混合溶劑作為流動(dòng)相。使用反相色譜，制劑中極性的附加劑及其他干擾組分先流出，不會(huì)停留在色譜柱上污染色譜柱。若分離酸性組分，如丹參素、黃芩甙、甘草酸等，可在流動(dòng)相中適量加入酸，如醋酸、磷酸，以抑制其解離；對(duì)酸性較強(qiáng)的組分，也可使用離子對(duì)色譜法，常用的反離子試劑有氫氧化四丁基銨等。若為堿性組分，如小檗堿、麻黃堿等，多采用反相離子對(duì)色譜法，在酸性流動(dòng)相中加入烷基磺酸鹽，有機(jī)酸也可使用無機(jī)陰離子，如磷酸鹽作為反離子。一般使用紫外檢測(cè)器，紫外檢測(cè)器靈敏、穩(wěn)定。