氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)

　?。?）加熱沉淀試驗(yàn)：加熱煮沸 →混濁或沉淀 （蛋白質(zhì)）+5%H₂SO₄（不加熱）→混濁或沉淀

　?。?）雙縮脲反應(yīng)：+40%NaOH，1%CuSO₄ →紫色、紅色或紫紅色（多肽、蛋白質(zhì)）

　?。?）茚三酮反應(yīng)：+0.2%茚三酮試液 →藍(lán)或藍(lán)紫色（氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)）

　?。?）吲哚醌反應(yīng)：+吲哚醌試液 →各種顏色（氨基酸）

　?。?）Millon反應(yīng)：+Hg，H₂NO₂ →紅色（蛋白質(zhì)分子中有酪氨酸組成）

　?。?）Hopkins-Cole反應(yīng)：+乙醛酸，濃硫酸 →各色（蛋白質(zhì)分子中有色氨酸組成）

　?。?）氨基酸的薄層層析檢查：吸附劑——硅膠G

　　展開(kāi)劑—— n-BuOH，n-BuOH：HAc：H₂O

　　顯色劑——0.25%茚三酮試液 →紫紅色斑點(diǎn)

　　（1）加熱或礦酸試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml于試管中，加熱至沸或加5％鹽酸，如發(fā)生混濁或有沉淀示含有水溶性蛋白質(zhì)。

　?。?）縮二脲試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加10％氧化鈉溶液2滴，充分搖勻，逐漸加入硫酸銅試液，隨加搖勻，注意觀察，如呈現(xiàn)紫色或紫紅色示可能含有蛋白質(zhì)和氨基酸。

　　凡蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵（－CONH－）者均有此反應(yīng)，能在堿性溶液中與Cu²⁺[醫(yī).學(xué)敎育網(wǎng)搜集整理]生成絡(luò)合物，呈現(xiàn)一系列的顏色反應(yīng)，二肽呈藍(lán)色，三肽呈紫色，加肽以上呈紅色，肽鍵越多顏色越紅。

　　（3）茚三酮試驗(yàn)，取檢品的水溶液1ml，加入茚三酮試液2－3滴，加熱煮沸4－5分鐘，待其冷卻，呈現(xiàn)紅色棕色或藍(lán)紫色（蛋白質(zhì)、胨類、肽類及氨基酸）。

　　氨基酸與茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被還原成仲醇，與所后成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍(lán)紫色的化合物。

　　【注】

　　①茚三酮試劑主要是多肽和氨基酸的顯色劑，反應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。試劑溶液pH值以5－7為宜，必要時(shí)可加吡啶數(shù)滴或醋酸鈉調(diào)整。

　?、诖朔磻?yīng)非常靈敏，但有個(gè)別氨基酸不能呈紫色，而呈黃色，如脯氨酸。

　?。?）氨基酸薄層層析檢出反應(yīng)：

　　①吸附劑：硅膠G。

　?、谡归_(kāi)劑：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5）

　?、埏@色劑：0.5％茚三酮丙酮溶液，噴霧后于1100烘箱放置5分鐘，顯藍(lán)紫允或紫色。