生物色譜法（Biochromatography）是20世紀80年代中后期問世，由生命科學與色譜分離技術交叉形成的一種極具發(fā)展?jié)摿Φ男屡d色譜技術。它利用藥物產(chǎn)生效應（或毒性）一般是通過藥物與靶點即生物大分子包括受體、通道、酶等結合的原理，應用于藥物活性成分的篩選、藥物作用機理的研究。它使效應成分的分離與篩選結合在一起，進而探討藥物的作用機理，是化學成分－效應－作用機理聯(lián)動的一種藥物研究方法，尤其適合于天然藥物效應物質基礎的研究，其獨特的優(yōu)點為其展示了光明的發(fā)展前景。

　　現(xiàn)代生命科學已闡明了細胞、細胞膜的結構組成，并逐步了解了酶、受體、抗體、傳輸?shù)鞍?、DNA、肝微粒體等在生命活動中所起的重要生理作用。若將這些活性生物大分子、活性細胞膜、甚至活細胞作為配體固著于色譜擔體上，制成一種生物活性填料，用于現(xiàn)代色譜分析技術，形成一種能夠模仿藥物與生物大分子、靶體或細胞相互作用的色譜系統(tǒng)，這樣藥物與生物大分子、靶體間的相互作用就能用色譜中的各種技術參數(shù)定量表征，我們就可以方便地研究藥物與生物大分子、靶體或細胞間的特異性、立體選擇性等相互作用，篩選活性成分，揭示藥物的吸收、分布、活性、毒副作用、構效關系、生物轉化、代謝等機理，探討藥物間的競爭、協(xié)同、拮抗等相互作用。

　　因此，建立中藥生物色譜技術，可以模擬生理或病理狀態(tài)下藥物在體內(nèi)進行生物活性表達的一些關鍵步驟，將中藥或中藥復方中的效應物質進行分離，能使效應成分的分離與篩選結合在一起，克服了以往先從中藥中分離有效部位或單體，再分析其藥效，從而使成分分離與效應篩選脫節(jié)的弊端；對已知結構的化合物進行中藥效應成分及作用靶點分析，加強中藥效應物質基礎、作用機理的研究。由于該技術能較快的提供中藥的效應物質基礎，并通過制備型HPLC制備相當數(shù)量的純品，就有可能針對性地設計提取工藝，以盡可能多地富集效應成分；了解了效應物質基礎，就有可能針對效應物質制定質量標準，也就可能針對效應物質的理化特征，研究其制劑形式，以保證藥品的安全、有效、可控、穩(wěn)定、均勻，實現(xiàn)中藥研究的現(xiàn)代化。

　　本研究首先采用紅細胞膜材料包被硅膠載體作為固定相，然后將此固定相裝柱，經(jīng)過最適條件考核后在線檢測當歸水提液的乙酸乙酯部位、正丁醇部位和剩余水提液在紅細胞膜包被的硅膠載體固定相色譜柱上的色譜行為，發(fā)現(xiàn)當歸水提液的乙酸乙酯部位在此色譜柱上有多組分保留，采用HPLC/MS聯(lián)用技術鑒定被保留成分是分子量為190，192，194，206，224，226，242，278，380，382amu的10個化合物，是為紅細胞膜包裹硅膠生物柱色譜法。這一方法同時存在的缺點是難以既考慮紅細胞膜所需要的溫度、壓力、離子強度及溶液pH等要求，又顧及色譜分析所需要的壓力、流動相及無機鹽離子等條件，難以達到既使生物材料選擇性結合中藥效應成分又讓色譜分離效應成分發(fā)揮最佳狀態(tài)。

　　為了解決紅細胞膜包裹硅膠生物柱色譜法的研究過程中存在的問題，第二階段研究以紅細胞直接與中藥提取液孵育后，洗去未結合的成分，接著用低pH緩沖液使紅細胞靶點失活，得到與靶點結合的效應成分，再對得到的效應成分進行色譜分析。此法獲得初步成功；實驗過程中也發(fā)現(xiàn)由于紅細胞釋放微量的細胞內(nèi)容物，有一定的干擾作用。

　　第三階段研究改用分離紅細胞膜作為生物固相材料，建立紅細胞膜固相色譜法。本方法主要工作分四步進行，第一步先對擬分析藥材的指紋圖譜進行研究，作為下一步紅細胞膜固相色譜研究的基礎。第二步是在模擬機體內(nèi)環(huán)境的條件下，首先讓紅細胞膜與藥材提取液中的有效成分進行特異性結合，然后用緩沖溶液洗去未被紅細胞膜特異性結合的其它成分，紅細胞膜保留的成分即是與紅細胞膜靶點特異性結合的成分，這樣就得到了對紅細胞靶點有激活或抑制作用的成分。接著用低pH緩沖溶液將與靶點特異性結合的成分從紅細胞膜上洗脫下來，以HPLC進行色譜分析，得到特征性的譜圖。第三步研究與紅細胞膜靶點特異性結合成分的色譜特征，與藥材提取液的指紋圖譜對照，確定特征峰在指紋圖譜中的位置，并以此特征圖譜作為指征，利用制備型高效液相色譜儀制備出純品，用HPLC-MS和NMR技術進行分子量與結構分析，最后確定與紅細胞膜靶點特異性結合的成分。第四步進行藥理活性分析。