非標(biāo)記抗體酶法:酶橋法是檢驗(yàn)技師考試的內(nèi)容,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理相關(guān)內(nèi)容供大家參考。
基本原理:首先用酶免疫動(dòng)物,制備效價(jià)高、特異性強(qiáng)的抗酶抗體,然后使用第二抗體作橋,將抗酶抗體連結(jié)在與組織抗原結(jié)合的第一抗體上,再將酶結(jié)合在抗酶抗體,經(jīng)呈色顯示抗原的分布。在此過程中,任何抗體均未被酶標(biāo)記,酶是通過免疫學(xué)原理與抗酶抗體結(jié)合,避免了共價(jià)連結(jié)對(duì)抗體和酶活性的損害,提高方法的敏感性,且能節(jié)省第一抗體的用量。
酶橋法克服了酶標(biāo)抗體法的缺點(diǎn),較好地保護(hù)了抗體和酶活性。但仍有其不足:①在酶抗體血清中,含有低親合力和高親合力兩類抗體,它們作為抗原與橋抗體結(jié)合,主要依賴于橋抗體對(duì)它的親合力,而與其本身對(duì)酶的親合力無關(guān),故兩者均可被連結(jié)在橋抗體上。低親合力的抗酶抗體與酶結(jié)合較弱,漂洗時(shí)易解離,使大部分酶(70%左右)丟失,降低了方法的敏感性。②第三步所用的抗酶抗體血清中,亦含有非特異性抗體,其抗原性與抗酶抗體相同,所以能與橋抗體結(jié)合,但不能與酶結(jié)合,影響組織抗原的顯示。