在臨床上，測(cè)定血清或其他組織中一些酶的水平對(duì)很多疾病的診斷、預(yù)防及判定病情的進(jìn)展具有重要意義。酶的測(cè)定可利用生化學(xué)的方法測(cè)定酶的催化活性和將酶作為蛋白用免疫方法測(cè)定酶的質(zhì)量。測(cè)定酶的催化活性是最為常用方法，它具有迅速、靈敏、成本低等特點(diǎn)。是目前臨床上測(cè)定酶水平廣泛使用的常規(guī)方法。但這種方法也存在著不足，作者擬就臨床酶學(xué)測(cè)定中存在的問(wèn)題及目前國(guó)際上解決問(wèn)題的途徑結(jié)合我們的一些調(diào)查結(jié)果做一闡述。

　　一、 測(cè)定酶催化活性存在的問(wèn)題

　　測(cè)定酶的催化活性雖然是臨床上最常用的方法，醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理但由于酶的催化活性不僅決定于酶的含量，還受多種因素的影響，如所用底物的性質(zhì)及濃度、反應(yīng)介質(zhì)的PH、溫度、離子強(qiáng)度、激活或抑制因子等，因此具有方法依賴性。這是測(cè)定酶的催化活性存在的主要問(wèn)題所在。因此對(duì)同一酶項(xiàng)目存在多種參考范圍，各實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果缺乏可比性，室間質(zhì)評(píng)用樣本的靶值難以確定，甚至有時(shí)會(huì)引起臨床上的誤診。國(guó)內(nèi)各臨床實(shí)驗(yàn)室間測(cè)定，酶活性結(jié)果的差異較大，明顯高于一般項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果。

　　二、 解決酶活性測(cè)定方法依賴性的途徑

　　對(duì)酶活性測(cè)定進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化是解決這一問(wèn)題的最好方法。早在20余年前國(guó)際上就開(kāi)始了這方面的工作。當(dāng)時(shí)提出的標(biāo)準(zhǔn)化途徑推薦使用統(tǒng)一的測(cè)定方法，一些學(xué)術(shù)團(tuán)體推出了臨床常用酶催化活性測(cè)定的推薦方法和參考方法。如國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IFCC）酶專(zhuān)家組已經(jīng)完成了r-谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT）（1983年）、堿性磷酸酶（ALP）（1983年）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）（1986年）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）（1986年）、肌酸激酶（CK）（1991年）、乳酸脫氫酶（LD）（1994年）及a-淀粉酶（a-AMS）（1998年）等的推薦方法。經(jīng)過(guò)多年的努力，成功地提高了酶測(cè)定的質(zhì)量和可比性。但效果仍不能令人滿意，還存在一些較嚴(yán)重的問(wèn)題：第一，很多學(xué)術(shù)團(tuán)體提出的推薦方法，即使原理相同，但試劑配方（緩沖液、底物、添加劑等）、反應(yīng)溫度等也可能不同，因此不同推薦方法間缺乏一致性；第二，推薦方法無(wú)法跟上分析方法和分析技術(shù)上的進(jìn)步；第三，它不適應(yīng)自動(dòng)化分析儀器。

　　最近國(guó)際上提出了酶活性的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化新途徑，就是使用公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物使不同的常規(guī)方法的測(cè)定結(jié)果得到統(tǒng)一。目前這項(xiàng)研究已取得了一定的進(jìn)展。IFCC臨床酶學(xué)校準(zhǔn)物工作組（IFCCWG-CCE）于1997年8月和1998年3月分別在瑞士和西班牙召開(kāi)了工作組會(huì)議，作者作為工作組成員出席了會(huì)議并參與了有關(guān)文件的制定，部分內(nèi)容作為IFCC的文件將會(huì)很快發(fā)表。

　　三、 酶校準(zhǔn)物的使用方法

　　使用酶校準(zhǔn)物的方法就是用公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物使一種或多種常規(guī)方法測(cè)定的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方法相同，也就是通過(guò)酶校準(zhǔn)物將不同方法得出的結(jié)果的數(shù)值按標(biāo)準(zhǔn)物測(cè)定值所選定上午標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)表達(dá)。它是利用標(biāo)準(zhǔn)物作為載體，使測(cè)定結(jié)果的數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)方法和常規(guī)方法間傳遞。這樣的話，使用標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)物，就有可能統(tǒng)一測(cè)定結(jié)果。

　　法國(guó)的Ferard教授（IFCC WG-CCE主席）幾年前就組織了5個(gè)法國(guó)實(shí)驗(yàn)室對(duì)各實(shí)驗(yàn)室常規(guī)患者血清樣本中的a-AMS、ALP、GGT等3種酶活性分別在校準(zhǔn)前后進(jìn)行了測(cè)定。每種酶有兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室參加研究，均使用相同的試劑盒在自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行測(cè)定。各實(shí)驗(yàn)室均使用統(tǒng)一的校準(zhǔn)物即由歐洲標(biāo)準(zhǔn)局（BCR）提供的酶活性有證參考物（CRM318、CRM319、CRM371）進(jìn)行校準(zhǔn)。通過(guò)使用統(tǒng)一的酶校準(zhǔn)物進(jìn)行校準(zhǔn)后，可使在不同溫度下（30℃、37℃）、使用不同緩沖液（ALP測(cè)定）、不同底物（a-AMS、GGT測(cè)定）或不同底物濃度（GGT測(cè)定）的試劑盒測(cè)定結(jié)果相對(duì)集中。

　　衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心與日立公司和寶靈曼公司合作，1997年在部分日立自動(dòng)生化分析儀用戶中進(jìn)行了使用統(tǒng)一校準(zhǔn)物進(jìn)行校準(zhǔn)前后測(cè)定質(zhì)控血清結(jié)果的調(diào)查。被調(diào)查的實(shí)驗(yàn)室為部分日立7170、7150、7060、7250自動(dòng)生化分析儀用戶。要求被調(diào)查實(shí)驗(yàn)室在使用由寶靈曼公司統(tǒng)一發(fā)放的校準(zhǔn)物（c.f.a.s）進(jìn)行校準(zhǔn)前后分別測(cè)定統(tǒng)一發(fā)放的兩個(gè)濃度的質(zhì)控血清。被調(diào)查的用戶使用的試劑盒為各自常規(guī)使用的普通試劑盒，多數(shù)為國(guó)產(chǎn)品。試驗(yàn)結(jié)果表明校準(zhǔn)后測(cè)定結(jié)果的分布明顯較標(biāo)準(zhǔn)化準(zhǔn)前集中，并較校準(zhǔn)前更接近質(zhì)控血清的靶值，表明使用統(tǒng)一的校準(zhǔn)品可使使用不同試劑測(cè)定酶活性的結(jié)果相對(duì)統(tǒng)一，增加了不同實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的可比性。但有一些實(shí)驗(yàn)室經(jīng)校準(zhǔn)后其測(cè)定結(jié)果仍很不滿意，這可能是這些實(shí)驗(yàn)室所采用的測(cè)定方法的特異性與校準(zhǔn)物定值所用方法不同（此次調(diào)查對(duì)各實(shí)驗(yàn)室使用的測(cè)定方法沒(méi)有做出規(guī)定），另外也不能完全排除質(zhì)控血清基質(zhì)效應(yīng)的影響。

　　要想通過(guò)這一途徑得到一致的酶活性測(cè)定結(jié)果，有2個(gè)條件必須滿足：第一是測(cè)定方法原理一致以保證擬要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的常規(guī)方法與參考方法的特異性盡可能相同。目前常用的證明的方法是用參考方法和常規(guī)方法同時(shí)測(cè)定患者樣本（50例以上、較寬分布范圍），觀察兩方法間的相關(guān)情況。第二個(gè)條件是酶校準(zhǔn)物的可轉(zhuǎn)換性（Commutability）。所用的酶校準(zhǔn)物必須在標(biāo)準(zhǔn)方法與擬校準(zhǔn)的常規(guī)方法中具有相同的特性。也就是說(shuō)校準(zhǔn)物的基質(zhì)效應(yīng)應(yīng)很小。

　　四、 公認(rèn)酶校準(zhǔn)物的來(lái)源

　　有關(guān)公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物的來(lái)源，目前已有幾個(gè)國(guó)家和國(guó)際組織發(fā)表了測(cè)定酶催化活性的參考方法。BCR和美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院（NIST）已經(jīng)研制出了某些酶的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物（有證參考物，certified referense material，CRM或standard reference material，SRM），其特點(diǎn)是這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的值可溯源到表示該特性值單位的準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)物上，每個(gè)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的值都附有規(guī)定置信水平的不確定度。表4為BCR推出的部分人血清基質(zhì)酶催化活性的有證參考物（CRM），這些標(biāo)準(zhǔn)物的值均是采用IFCC推薦方法確定的活性。目前IFCC推薦方法的反應(yīng)溫度均為30℃，與唱歌歸方法中常用的37℃間存在如何轉(zhuǎn)換的問(wèn)題。但在1998年3月西班牙會(huì)議上，IFCC已經(jīng)決定在近期內(nèi)把所有IFCC測(cè)定酶活性的推薦方法的溫度修改成37℃，將使這一困擾我們多年的問(wèn)題得到解決。