1、原理:在細(xì)胞凋亡早期位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸(PS)遷移至細(xì)胞膜外測(cè)。磷脂結(jié)合蛋白V(Annexin V)是鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白,它于PS具有高度的結(jié)合力。因此,Annexin V可以作為探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞外測(cè)的磷脂酰絲氨酸。故利用對(duì)PS有高度親和力的Annexin V,將Annexin V標(biāo)記上熒光素(如異硫氰酸熒光素FITC),同時(shí)結(jié)合使用PI拒染法(因壞死細(xì)胞PS亦暴露于細(xì)胞膜外測(cè),且對(duì)PI高染)進(jìn)行凋亡細(xì)胞雙染法后用流式細(xì)胞儀即可檢測(cè)凋亡細(xì)胞。
2、結(jié)果判斷:正?;罴?xì)胞Annexin V、PI均低染;凋亡細(xì)胞Annexin V高染、PI低染;壞死細(xì)胞Annexin V/PI均高染。
3、應(yīng)用價(jià)值:細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),膜上的PS外露早于DNA斷裂發(fā)生,因此Annexin V聯(lián)合PI染色法檢測(cè)早期細(xì)胞凋亡較TUNEL法醫(yī)學(xué)`教育網(wǎng)搜集整理更為靈敏。又Annexin V聯(lián)合PI染色不需固定細(xì)胞,可避免PI染色因固定造成的細(xì)胞碎片過(guò)多及TUNEL法因固定出現(xiàn)的DNA片段丟失。因此,Annexin V聯(lián)合PI法更加省時(shí),結(jié)果更為可靠,是最為理想的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。