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免疫組化(LP法)操作步驟-醫(yī)學(xué)檢驗技士考試

2013-12-18 10:35 來源:
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免疫組化(LP法)操作步驟是醫(yī)學(xué)檢驗技士考試所涉及的內(nèi)容,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理如下,供廣大醫(yī)學(xué)檢驗技士考試考生參考學(xué)習(xí)。

1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進行

2.緩沖液洗3min/2次。

3.為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10-15分鐘。

4.緩沖液洗5min/2次。

5.滴加UltraVBlock,在室溫下孵育5分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過10分鐘,否則會導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有5-10%正常羊血清,這一步可以省略。)

6.緩沖液洗5min/2次。

7.滴加一抗工作液37℃孵育1-2小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

8.緩沖液洗5min/2次。

9.滴加PrimaryAntibodyEnhancer(增強子),在室溫下孵育20分鐘。

10.緩沖液洗5min/2次。

11.滴加HRPPolymer(酶標二抗),在室溫下孵育30分鐘。

(注:HRPPolymer對光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)

12.緩沖液洗5min/2次。

13.向1mlDABPlusSubstrate中滴加1-2滴DABPlusChromogen,混勻后滴加到切片上,孵育3-15分鐘。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)(具體時間由染色深淺決定。)14.自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。

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