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鼻淵舒口服液臨床研究

材料

1 藥物鼻淵舒口服液的制備,由成都華神制藥廠生產(chǎn),主要由黃芩、龍膽草、白芷、柴胡、蒼耳子、辛夷、黃芪、川芎等組成。稀化粘素,德國(guó)保時(shí)佳大藥廠生產(chǎn), 進(jìn)口注冊(cè)證號(hào):X980578。青霉素V鉀片,長(zhǎng)春市新安制藥廠生產(chǎn),批號(hào):133589。2 動(dòng)物 SD大鼠90只,一級(jí)動(dòng)物,體重200~250 g,3月齡,雌雄各半,四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):川實(shí)動(dòng)管第70號(hào)。飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥理實(shí)驗(yàn)中心,室內(nèi)溫度由空調(diào)控制在20~25℃。

3 試劑TNF-α(N-19)一抗購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology 公司,其二抗以及試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。

方法

1 動(dòng)物分組 自由喂養(yǎng) 1 周后,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為①中藥高劑量組;②中藥中劑量組;③中藥低劑量組;④西藥1(稀化粘素)組;⑤西藥2(青霉素V鉀)組;⑥西藥+中藥組;⑦模型組;⑧假模型組;⑨空白組。每組10只,共90只。2 急性鼻竇炎大鼠模型 依據(jù)Y. Ge1的方法制造模型改進(jìn)。腹腔注射鹽酸氯胺酮5 mg/100 g體重,必要時(shí)用一般劑量重復(fù) 1 次,做全麻。用鹽酸利多卡因20 mg/ml,配腎上腺素0.012 5 mg,作鼻背下注射麻醉。剃毛,用碘伏消毒備皮,在面中線上中1/3交界處旁開(kāi)3 mm以45°角進(jìn)針1.5 mm置石蠟適量于內(nèi)封口;然后塞入適量帶有金黃色葡萄球菌的明膠海綿于內(nèi),由于是微創(chuàng),不必縫合。以上過(guò)程應(yīng)在顯微鏡下操作,以確保動(dòng)作到位。假模型組造模方法同上,但注入明膠海綿的不是金黃色葡萄球菌,而是生理鹽水。

給藥情況

從造模成功后的第1天開(kāi)始灌胃,療程時(shí)間為7 d,灌胃情況如下:

(1)中藥高劑量組 每日以相當(dāng)于臨床成人劑量20倍的鼻淵舒口服液〔相當(dāng)于鼻淵舒口服液10 ml/(kg·d)-1〕灌胃,分早晚兩次灌服。

(2 )中藥中劑量組 每日以相當(dāng)于臨床成人劑量10倍的鼻淵舒口服液〔相當(dāng)于鼻淵舒口服液5 ml/(kg·d)-1〕灌胃,分早晚兩次灌服。

(3) 中藥低劑量組 每日以相當(dāng)于臨床成人劑量5倍的鼻淵舒口服液〔相當(dāng)于鼻淵舒口服液2.5 ml/(kg·d)〕灌胃,分早晚兩次灌服。

(4 )西藥1組每日以相當(dāng)于臨床成人劑量5倍的稀化粘素〔相當(dāng)于稀化粘素75 mg/(kg·d)〕灌胃,分早晚兩次灌服。

(5 )西藥2組每日以相當(dāng)于臨床成人劑量5倍的青霉素V鉀〔相當(dāng)于青霉素V鉀 125 mg/(kg·d)〕;灌胃,分早晚兩次灌服。

(6) 假模型組每日以與用藥組等容(2 ml/d)的生理鹽水灌胃,分早晚兩次灌服。

(7 )模型組每日以與用藥組等容(2 ml/d)的生理鹽水灌胃,分早晚兩次灌服。

(8 )空白組不灌胃

(9 )中藥+西藥組每日以臨床成人劑量6倍的鼻淵舒口服液(濃度0.815 925 g/ml)2~3 ml和含藥量相當(dāng)于150 mg·kg-1·d-1的青霉素與稀化粘素灌胃,分早晚二次灌服。給藥方法參照《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法》。

檢測(cè)方法首先要及時(shí)把取下的鼻黏膜放在固定液中保存,經(jīng)脫鈣后,按照下列步驟進(jìn)行:①石蠟切片脫蠟至水,用PBS液(0.01 mol/L pH7.4)沖洗3次×5 min。②3%H2O2室溫孵育10 min,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性,室溫下孵育10 min。③蒸餾水沖洗,PBS浸泡5 min。④10%的正常山羊血清(PBS稀釋?zhuān)┓忾],室溫孵育10 min。傾去血清,勿洗,滴加1:100比例稀釋的一抗,37℃孵育1 h。⑤PBS沖洗,5 min×3次。⑥滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液,37℃或室溫孵育30 min。⑦PBS沖洗,5 min×3次。⑧滴加第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,37℃孵育30 min。⑨PBS沖洗,5 min×3次。⑩顯色劑顯色(DAB或AEC)。然后用自來(lái)水充分沖洗,蘇木精復(fù)染,封片。用顯微鏡結(jié)合計(jì)算機(jī)圖形圖像分析系統(tǒng),在200×光鏡下,隨機(jī)選取3個(gè)視野進(jìn)行面積、積分光密度、平均黑度的測(cè)量。計(jì)量資料以±s表示,用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

結(jié)果

模型組大鼠鼻黏膜TNF-α積分光密度、平均光密度分別與測(cè)量視野面積和的比值,明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01);平均黑度值明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01);但黃染面積與面積總和的比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白組相比:①積分光密度/面積總和的比值,中藥低、中劑量組、西藥一組、假模型組無(wú)顯著性差異(P>0.05),其中以中藥低劑量組最為接近;②黃染面積/面積總和的比值,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;③平均光密度與面積總和的比值,西藥1組、中藥低劑量組、西藥2組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。④平均黑度,中藥低、中組,西藥1,2組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

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