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麻疹病毒IgM抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)操作過程

2012-04-09 15:11 來源:
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[前言]

麻疹是由麻疹病毒引起的急性呼吸道傳染病。好發(fā)于冬春季,6個(gè)月至5歲兒童發(fā)病率最高,近年來由于疫苗免疫的結(jié)果,麻疹流行強(qiáng)度減弱,發(fā)病年齡后移。病毒可通過空氣飛沫傳播。易感者接觸麻疹病毒,90%發(fā)病,所以傳染性強(qiáng),。病人是唯一的傳染源。自出疹前2天至出疹后5天,傳染性最強(qiáng)。任何人都容易感染,尤其兒童最多見,隱性感染率低。病毒先侵入眼、呼吸道,并在局部粘膜增殖,少量入血。然后隨血流侵入全身淋巴組織和單核吞噬系統(tǒng),并在其內(nèi)大量增殖,再次入血,即第二次病情血癥,出現(xiàn)高熱和出疹,病毒血癥持續(xù)至出疹后第2天。全身性遲發(fā)型超敏性細(xì)胞免疫反應(yīng)。免疫性損害造成組織壞死和炎性反應(yīng)。可見皮疹,由于真皮腫脹,增生皮疹鼓出,突出于皮面,為充血性的。有單核細(xì)胞炎癥浸潤,紅細(xì)胞崩解,血漿滲出。所以皮疹有色素沉著,表皮細(xì)胞壞死、脫屑。還可見柯氏斑,是粘膜下的細(xì)胞變性,壞死,多核巨細(xì)胞變引起的,呈白點(diǎn)狀。病毒侵襲任何組織時(shí)均出現(xiàn)多核巨細(xì)胞。呼吸道病變最嚴(yán)重,可并發(fā)麻疹腦炎。麻疹病毒可干擾人體非特異性免疫力,干擾被結(jié)核菌素致敏的淋巴細(xì)胞敏感性,但極易繼發(fā)細(xì)菌感染。麻疹的潛伏期6—18天,發(fā)病突然。

[原理]

本試劑盒先用吸收液去除IgG,再檢測人血清或血漿中的抗-HSV-Ⅱ?IgM,消除假陰性。具有簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)。

[試劑廠家]

深圳市綠瀚生物技術(shù)有限公司[試劑盒組成] 1、包被板條2、定標(biāo)液3、陰陽對照血清4、酶結(jié)合物5、底物6、顯色液7,終止液8,洗滌液9,吸收液[試劑的穩(wěn)定性與貯存]試劑自生產(chǎn)日起避光貯存于2-8℃,有效期內(nèi)穩(wěn)定。

[標(biāo)本的收集與處理]

標(biāo)本為無溶血血清。

[操作步驟]

1,樣本稀釋:用血清稀釋液1:41稀釋定標(biāo)液、質(zhì)控、血清,取稀釋定標(biāo)液、質(zhì)控、血清150ul于另一管中,加吸收液150ul,徹底混勻,室溫(21-25℃)靜置20+/-5分鐘。

2,加樣:取包被板,加入吸收稀釋定標(biāo)液、質(zhì)控、血清樣本各100ul.并設(shè)空白對照一孔,室溫(21-25℃)靜置20+/-2分鐘。甩去,加洗滌液一滴,蒸餾水洗滌5次,拍干。

3,反應(yīng):加酶結(jié)合物100ul,室溫(21-25℃)靜置20+/-2分鐘。甩去,每孔加洗滌液一滴,蒸餾水洗滌5次,拍干。

4,顯色:每孔加底物和顯色液各100ul,室溫(21-25℃)靜置10+/-2分鐘。以陽性對照出現(xiàn)明顯藍(lán)色為準(zhǔn)。

[結(jié)果判定]

1、目測法:在白色背景下觀察各孔顏色,明顯蘭色為陽性,無色或極淡蘭色為陰性。

2、酶標(biāo)儀檢測(選擇波長450nm):每孔加終止液一滴,用空白孔校零,測定各孔OD值。

臨界值(C.O.)=2.1×陰性對照OD值

(1)樣本OD值S/C.O.≥1.0判為陽性;

(2)樣本OD值S/C.O.<0.9判為陰性。

(3)樣本OD值S/C.O.介于0.9與1.0之間,判為可疑,需重復(fù)檢測。

注:(1)當(dāng)陽性對照/陰性對照OD值≥5時(shí),試驗(yàn)結(jié)果有效;(2)陰性對照OD值小于0.05時(shí),按0.05計(jì)算;大于0.05時(shí),按實(shí)際值計(jì)算。

[質(zhì)量控制]為確保測試結(jié)果準(zhǔn)確可靠,每批測試均應(yīng)放置陰陽性質(zhì)控血清與被檢樣品同時(shí)測試,用以檢查試劑性能。

[注意事項(xiàng)]

1、不同批號(hào)的試劑不可混用。

2、試劑盒用前先平衡至室溫。含血球的標(biāo)本易出現(xiàn)假陽性,應(yīng)避免使用。

3、未用完的板條應(yīng)及時(shí)封存于易封袋中。

4、滴加試劑前,應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻。滴加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直。

5、試劑盒置于2-8℃貯存,有效期6個(gè)月6、本試劑應(yīng)視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實(shí)驗(yàn)室規(guī)程操作。

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