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巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測(cè)定

2015-08-23 09:23 來(lái)源:
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巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測(cè)定:

巨噬細(xì)胞富含溶酶體酶,如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等,測(cè)定這些酶的活性也是衡量巨噬細(xì)胞功能的實(shí)用指標(biāo)之一。

(1)硝酸鉛法:本法優(yōu)點(diǎn)是用普通試劑醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)|搜集整理,價(jià)格便宜,一般實(shí)驗(yàn)室均有條件做,封片后可較長(zhǎng)時(shí)間保存,并可用電子顯微鏡研究觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。缺點(diǎn)是細(xì)胞必需固定,而且固定條件要求嚴(yán)格,如處理不當(dāng)酶活性易消失,反應(yīng)步驟也較多。

該法基本原理是在適當(dāng)?shù)拿感詶l件下,巨噬細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后,后者與硝酸鉛反應(yīng)產(chǎn)生磷酸鉛,而磷酸鉛再與硫酸銨反應(yīng)則形成黑色硫化鉛,沉積在胞漿內(nèi)酸所在處,顯示棕黑色顆粒。酶活性強(qiáng)弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細(xì)不同而分級(jí)判斷,顆粒數(shù)量少則細(xì)的為+,顆粒多而粗的為++,顆粒很多且很粗的為+++.

(2)偶氮法:本法操作簡(jiǎn)便,反應(yīng)液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后,形成萘酚和磷酸鹽,而萘酚結(jié)構(gòu)中的羥基(-OH)鄰近的活潑碳原子,立即與偶氮染料起反應(yīng),而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處,缺點(diǎn)是封片后保存時(shí)間短。

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