免疫比濁測(cè)定的影響因素-檢驗(yàn)職稱(chēng)考點(diǎn)
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1.抗原抗體的比例 是濁度形成的關(guān)鍵因素。
形成的IC分子小,而且會(huì)發(fā)生再解離,使?jié)岫确炊陆担馍⑸湟鄿p少,這就是高劑量鉤狀效應(yīng)。當(dāng)抗體過(guò)量時(shí),IC的形成隨著抗原遞增而增加,至抗原、抗體最適比例處達(dá)最高峰,這就是經(jīng)典的海德堡曲線理論。
在反應(yīng)體系中需保持抗體適當(dāng)過(guò)量,如形成抗原過(guò)量則造成測(cè)定的準(zhǔn)確性降低。
2.抗體的質(zhì)量 對(duì)免疫比濁測(cè)定法的抗體要求
(1)特異性強(qiáng)
(2)效價(jià)高:低效價(jià)(<1:20)抗體會(huì)增加非特異性濁度(偽濁度)的產(chǎn)生。
(3)親和力強(qiáng):則抗體的活性高,可加快抗原抗體反應(yīng)的速度,且形成的IC較牢固,不易發(fā)生解離。
(4)R型和H型抗體:
R型抗體是指以家兔為代表的小型動(dòng)物被注射抗原免疫后制備的抗血清。這類(lèi)抗血清的特點(diǎn)是親和力較強(qiáng),抗原抗體結(jié)合后不易發(fā)生解離。
H型抗體是指以馬為代表的大型動(dòng)物注射抗原后制備的抗血清,這類(lèi)抗血清的親和力弱,抗原抗體結(jié)合后極易解離。
3.抗原抗體反應(yīng)的溶液
反應(yīng)液最適pH為6.5~8.5。常使用磷酸鹽緩沖液作為免疫比濁法的反應(yīng)液。
在一定范圍內(nèi),離子強(qiáng)度大,IC形成越快。
4.增濁劑
某些非離子型親水劑對(duì)促進(jìn)IC的形成有顯著的增強(qiáng)作用,如聚乙二醇(PEG)、吐溫-20,其作用是消除蛋白質(zhì)(抗原或抗體)分子周?chē)碾娮釉坪退瘜樱龠M(jìn)抗原、抗體分子靠近,結(jié)合形成大分子復(fù)合物。
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