代謝物酶促終點(diǎn)法測定如何進(jìn)行呢？為了幫助更多考生了解，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家搜集整理如下：

在代謝物酶促反應(yīng)中，隨著時間的延續(xù)，待測物濃度逐漸減少，產(chǎn)物逐漸增多，一定時間后待測物全部轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物，反應(yīng)趨于平衡。

測定反應(yīng)完全后（反應(yīng)達(dá)到平衡時）待測物或產(chǎn)物變化的總量，即終點(diǎn)法，又稱平衡法。

代謝物濃度酶促終點(diǎn)法測定的基本條件是：

①待測物濃度[S]應(yīng)遠(yuǎn)小于其米氏常數(shù)K_m，此時任何時刻的反應(yīng)速度ν=V[S]/K_m，呈一級反應(yīng)動力學(xué)；

②反應(yīng)配方中所用酶量應(yīng)足夠大，而K_m應(yīng)小，以保證有較快的反應(yīng)速度完成測定。

（1）一步法

如果待測物與產(chǎn)物在理化性質(zhì)上有便于檢測的差異，如吸收光譜不同則可直接測定待測物或產(chǎn)物本身信號的改變來進(jìn)行定量分析，這種是最簡單的底物法測定。

（2）酶促偶聯(lián)法

如果酶促反應(yīng)的底物或產(chǎn)物沒有可直接檢測的成分，則可將反應(yīng)某一產(chǎn)物偶聯(lián)到另一個酶促反應(yīng)中，而達(dá)到檢測的目的。

一般把第一步反應(yīng)稱為輔助反應(yīng)，所用工具酶叫輔助酶，偶聯(lián)的反應(yīng)稱為指示反應(yīng)，指示反應(yīng)所用的工具酶叫指示酶。

偶聯(lián)反應(yīng)應(yīng)設(shè)計為非限速反應(yīng)。

（3）最常用的偶聯(lián)指示系統(tǒng)有兩個

以脫氫酶為指示系統(tǒng)的酶促反應(yīng)，不管是終點(diǎn)法測定，還是動力學(xué)法測定，共同的缺陷是受到內(nèi)源性脫氫酶及其底物如乳酸脫氫酶和乳酸/丙酮酸的干擾。

為了消除乳酸脫氫酶的干擾，在反應(yīng)設(shè)計時一般采用加入乳酸脫氫酶的抑制劑的方法來解決。

終點(diǎn)法還受到乳糜、黃疸和溶血的影響，測定時需設(shè)定樣品空白。

終點(diǎn)法實(shí)驗(yàn)設(shè)計應(yīng)考慮的問題

①所用工具酶的特異性。

②酶對待測物的親和力，在保證測定線性的前提下，K_m要盡量小。

③酶的用量要足夠大。

④工具酶中的雜酶應(yīng)低于允許限。

⑤反應(yīng)平衡點(diǎn)：應(yīng)創(chuàng)造條件使反應(yīng)朝正反應(yīng)方向進(jìn)行。

⑥試劑中的附加劑（如穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑），不應(yīng)抑制酶的活性。

以上是小編為大家整理的內(nèi)容，希望對大家有所幫助，更多關(guān)于臨床檢驗(yàn)技師的資訊請關(guān)注醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)！