隱孢子蟲的病原學(xué)診斷方法有哪些?
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糞便(水樣或糊狀便為好)直接涂片染色,檢出卵囊即可確診。有時(shí)嘔吐物和痰也可作為受檢標(biāo)本。
檢查方法有:
(1)金胺—酚染色法:新鮮或甲醛固定后的標(biāo)本均可用此法,染色后在熒光顯微鏡下觀察。卵囊圓形呈明亮乳白—黃綠色熒光。低倍鏡下為圓形小亮點(diǎn),周邊光滑,蟲體數(shù)量多時(shí)可遍布視野,猶如夜空中繁星。高倍鏡下卵囊壁薄,中央淡染,似環(huán)狀。本法簡(jiǎn)便、敏感,適用于批量標(biāo)本的過(guò)篩檢查。
(2)改良抗酸染色法:染色后背景為藍(lán)綠色,卵囊呈玫瑰色,圓形或橢圓形,囊壁薄,內(nèi)部可見1~4個(gè)梭形或月牙形子孢子,有時(shí)尚可見棕色塊狀的殘留體。但糞便標(biāo)本中多存在紅色抗酸顆粒,形同卵囊,難以鑒別。
(3)金胺酚—改良抗酸染色法:先用金胺—酚染色,再用改良抗酸染色復(fù)染,用光學(xué)顯微鏡檢查,卵囊形態(tài)同抗酸染色所示,但非特異性顆粒呈藍(lán)黑色,顏色與卵囊不同,有利于查找卵囊,優(yōu)化了改良抗酸染色法,提高了檢出率。
(4)基因檢測(cè):采用PCR和DNA探針技術(shù)檢測(cè)隱孢子蟲特異DNA,具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)。在PCR中使用相應(yīng)的引物,可擴(kuò)增出隱孢子蟲DNA特異的452bp片段,其敏感性可達(dá)0.1pg水平。
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