甾體激素類藥物基本結構：均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。

　　分類：

　　1.腎上腺皮質激素：皮質酮衍生物，如可的松、潑尼松、地塞米松等。

　　本類藥物多為C21-羥基所形成的酯類。

　　結構特點是具有21個C原子：A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有α-醇酮基并多數(shù)有α-羥基；C10、C13：具有角甲基；C11：具有羥基或酮基；其它：有些皮質激素具有Δ1，6α、9α鹵素，16α羥基，6α、12α、16α、16β甲基等。

　　2.雄性激素及蛋白同化激素：甲睪酮、丙酸睪酮、十一酸睪酮等；蛋白同化激素有苯丙酸諾龍。

　　結構特點：雄性激素具有19個C原子；蛋白同化激素具有18個C原子（C10上無角甲基）；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：無側鏈，多數(shù)是一個β-羥基，有些是由他形成的酯，有些具有α-甲基。

　　3.孕激素：也稱為黃體酮激素或孕酮。典型藥物為黃體酮。

　　中國藥典收載有：黃體酮、醋酸甲羥孕酮、己酸羥孕酮、醋酸甲地孕酮原料及制劑；醋酸氯地孕酮原料等。

　　結構特點：具有21個C原子；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有甲酮基，有些具有α-羥基，與醋酸、已酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羥孕酮等）；其它：有些具有Δ6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。

　　4.雌激素：又稱卵泡激素。雌二醇、炔雌醚、苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇原料及制劑等。

　　結構特點：具有18個C原子；A環(huán)：為苯環(huán)，C3上具有酚羥基且有些形成了酯或醚；C10：無角甲基；C17：具有β-羥基或酮基，有些羥基形成了酯，還有些具有乙炔基。

　　口服避孕藥：炔諾酮、炔諾孕酮、炔孕酮。多數(shù)在A環(huán)上具有Δ4-3-酮基，與黃體酮和睪酮一致；有的在C17上具有β-羥基、α-乙炔基或甲酮基；有的在C10上無角甲基，與雌激素相同。

　　鑒別試驗：

　　呈色反應1.與強酸的呈色反應：許多甾體激素能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中與與硫酸的呈色反應應用較廣。

　　藥品名稱顏色熒光加水稀釋后的變化醋酸可的松黃或微帶橙無顏色消失溶液澄清氫化可的松棕黃至紅綠色黃至橙黃微帶綠色熒光，少量絮狀沉淀潑尼松橙無黃至藍綠潑尼松龍深紅無紅色消失，灰色絮狀沉淀炔雌醇深紅黃綠地塞米松磷酸鈉黃或紅棕無某些甾體激素藥物與硫酸-乙醇或硫酸-甲醇作用而呈色。如甲睪酮：取本品數(shù)毫克，加硫酸-乙醇（2：1）1ml使溶解，即顯黃色并帶有黃綠色熒光。

　　2.官能團的呈色反應：

　?、貱17-α-醇酮基的呈色反應：皮質激素類藥物分子結構中C17位上的α-醇酮基具有還原性，能與氧化劑四氮唑鹽反應而呈色。如醋酸潑尼松在堿性條件下與氯化三苯四氮唑試液反應生成紅色。

　?、谕某噬磻虹摅w激素分子結構中含有酮基，如C3-酮基和C20-酮基，均能與2，4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼等羰基試劑呈色。例如，醋酸可的松、氫化可的松等，其甲醇或乙醇溶液加新制的硫酸苯肼試液，加熱即顯黃色。

　?、奂淄某噬磻虹摅w激素分子結構中含有甲酮基乙基活潑亞甲基時，能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛類反應呈色。其中亞硝基鐵氰化鈉反應可認為是黃體酮的靈敏、專屬的鑒別方法，在一定的條件下，黃體酮顯藍紫色，其他常用甾體激素均不顯藍紫色，而呈現(xiàn)淡橙色或不顯色。

　?、苡袡C氟的呈色反應：一些含氟的甾體激素藥物（如醋酸氟輕松、醋酸地塞米松等），經(jīng)氧瓶燃燒法后生成無機氟化物，在12%醋酸鈉的稀醋酸中與茜素氟藍及硝基亞鈰起反應，即顯藍紫色。

　?、莘恿u基的呈色反應：C3為酚羥基的雌激素，能與重氮苯磺酸反應生成紅色偶氮染料。如JP（13）收載的苯甲酸雌二醇利用該法進行鑒別。

　　沉淀反應1.與斐林試劑的沉淀反應皮質激素的C17-α-醇酮基具強還原作用，與斐林試劑反應生成橙紅色氧化亞銅沉淀。

　　2.與氨制硝酸銀的沉淀反應皮質激素的C17-α-醇酮基具強還原性，與氨制硝酸銀反應，生成黑色金屬銀沉淀。

　　3.與硝酸銀的沉淀反應含炔基的甾體激素，如炔雌醇、炔諾酮，遇硝酸銀獎試液，即生成白色的炔雌醇銀鹽沉淀及白色炔諾酮銀沉淀。

　　4.與硝酸-硝酸銀的沉淀反應甾體激素（如丙酸氯貝他索、丙酸貝氯米松）中有機結合的氯，經(jīng)加熱或進行有機破壞生成無機氯化物，再在硝酸酸性條件下與硝酸銀作用，生成氯化銀的白色沉淀。

　　制備衍生物測定其熔點利用甾醇、甾酮類藥物與一些試劑反應生成酯、肟、縮氨脲，或利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應的母體，然后測定其熔點進行鑒別。

　　1.酯的生成：如炔雌醇制成苯甲酸酯。

　　2.酮肟的生成：如黃體酮與鹽酸羥胺作用生成黃體酮雙酮肟為例。

　　3.縮氨基脲的生成：ChP收載苯丙酸諾龍生成其縮氨基脲衍生物。

　　4.酯的水解：如丙酸睪酮用醇制氫氧化鉀水解為例。

　　水解產(chǎn)物的反應戊酸雌二醇、已酸羥孕酮等藥物，先在堿液中水解，經(jīng)酸化加熱分別產(chǎn)生戊酸、己酸特臭，用此法可鑒別這兩種藥物。

　　紫外分光光度法丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20μg/ml）在239nm波長處有最大吸收。

　　紅外分光光度法薄層色譜法中國藥典收載的炔諾酮、炔雌醚片、丙酸睪酮注射液、倍他米松磷酸鈉、醋酸氯地孕酮片、醋酸甲羥孕酮片、醋酸潑尼松片、苯丙酸諾龍注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液、復方己酸孕酮注射液、復方炔諾酮片、復方炔諾酮膜、復方炔諾孕酮片、復方炔諾孕酮滴丸、哈西奈德軟膏等甾體激素藥物均采用了薄層色譜（標準品對照法）進行鑒別。

　　高效液相色譜法：

　　中國藥典中醋酸氟輕松軟膏、醋酸氟氫可的松軟膏、醋酸曲安奈德軟膏、丙酸倍氯米松軟膏、地塞米松磷酸鈉滴眼液、哈西奈德乳膏等的鑒別試驗。

　　特殊雜質的檢查1.游離磷酸：地塞米松磷酸鈉（中國藥典收載）、氫化可的松磷酸鈉中檢查游離磷酸。

　　高法系利用酸性溶液中磷酸與鉬酸作用生成磷鉬酸銨，再經(jīng)還原形成磷鉬酸藍（鉬藍），在740nm波長處有最大吸收。

　　2.甲醇和丙酮：地塞米松磷酸鈉中檢查甲醇和丙酮。

　　本品在生產(chǎn)工藝中大量使用甲醇和丙酮，因此藥典規(guī)定作甲醇與丙酮殘留量檢查。甲醇限量為3.1ng.3.雌酮：炔雌醇中檢查雌酮。

　　本法系根據(jù)雌酮的Zimmermann反應來檢查的。即在羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中，與間二硝基苯反應呈紅～藍色。雌酮是17-酮甾類，因此根據(jù)該反應生成紫紅色化合物。在此操作中，如果不使用純度高的間二硝基苯，則呈褐色而難于判定。

　　4.硒中國藥典中規(guī)定醋酸地塞米松、醋酸氟輕松要檢查"硒".其原理為在氧瓶燃燒破壞后的吸收液中加鹽酸羥胺，使Se6+還原為Se4+，在pH2.0±0.2的條件下與2.3-二氨基萘試液作用，生成4，5-苯丙苯硒二唑，用環(huán)己烷提取，于378nm波長處呈最大吸收。

　　5.其他甾體①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測定1.高效液相色譜法2.紫外分光光度法3.四氮唑比色法四氮唑鹽的種類：①2，3，4-三苯基氯化四氮唑（TTC），也稱紅四氮唑（RT），其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲zan②藍四氮唑（BT），即3，3-二甲氧苯基-雙-4，4-（3，5-二苯基）氯化四氮唑，其還原產(chǎn)物為暗藍色的雙甲zan反應原理：皮質激素C17-α-醇酮基（-CO-CH2OH）具有還原性，在強堿性試液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲zan.生成顏色隨所用試劑和條件的不同而定，多為紅色或藍色。

　　測定方法：中國藥典采用氯化三苯四氮唑法。

　　例如醋酸潑尼松龍軟膏的含量測定。

　　討論：

　　①基團影響：C11-酮基的反應速度快于C11-羥基甾體；C21-羥基酯化后較其母體羥基的反應速度慢；當酯化了的基團為三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯時，反應更慢。

　?、谌軇┖退值挠绊懀汉看髸r會使呈色速度減慢，但含水量不超過5%時，對結果幾無影響，因此可采用95%乙醇。

　　③堿的種類及加入順序的影響：在各類堿中，采用氫氧化四甲基銨能得到滿意結果，故最為常用。以先加四氮唑鹽溶液再加堿液較好。

　?、芸諝庵醒跫肮饩€的影響：反應及其產(chǎn)物對光敏感，故應避光。

　　⑤溫度與時間的影響：一般室溫或30℃恒溫條件下顯色。中國藥典多數(shù)25℃暗處反應40～45min.4.異煙肼比色法甾體激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合形成黃色異煙腙，在一定波長下具有最大吸收。

　　某些具有兩個酮基的甾體激素可形成雙腙，如黃體酮、可的松和氫化可的松等。

　　本法主要用于甾體激素制劑的測定，如倍他米松軟膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等的含量測定。

　　討論：①溶劑的選擇：只用用無水乙醇和無水甲醇才能得到滿意的結果，其他溶劑因受到異煙肼鹽酸鹽在其中溶解度的限制不能采用。

　　②酸的種類和濃度以及異煙肼的濃度：當酸與異煙肼試劑的摩爾比為2：1時可獲得最大吸收度。

　?、鬯帧囟?、光線和氧的影響：當溶劑中含水量增高，吸收度隨之降低。溫度升高，反應加速。當在具塞玻管中不致使溶劑揮發(fā)及吸收水分的情況下，光與氧不影響反應。

　?、荜P于反應的專屬性：具有Δ4-3-酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定量地與酸性異煙肼反應。其他甾酮化合物需在長時間放置或加熱后方可反應完全，因此在上述反應條件下，本法對Δ4-3-酮甾體具有一定的專屬性。

　　5.Kober反應比色法Kober反應是指雌激素與硫酸-乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后重新加熱發(fā)生顏色改變，并在515nm附近有最大吸收。

　　Kober反應有兩步：①與硫酸-乙醇光熱產(chǎn)生黃色，在465nm處有最大吸收；②加水或稀硫酸稀釋，重新加熱顯桃紅色，在515nm處有最大吸收。

　　中國藥典采用本法測定炔雌醇片及復方炔諾孕酮片、復方炔諾孕酮滴丸、復方左炔諾孕酮滴丸中的炔雌醇的含量。

　　維生素類藥物維生素A維生素A的結構為具有一個共軛多烯側鏈的環(huán)己烯，因而具有許多立體異構體。

　　天然維生素A主要是全反式維生素A.性質：具紫外吸收，易氧化變質，能與三氯化銻呈色，與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或是由醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。

　　鑒別試驗①三氯化銻反應（Carr-price反應）：維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液中，即顯藍色，漸變成紫紅色。

　?、谧贤馕展庾V：維生素A分子中含有5個共軛雙鍵，其無水乙醇溶液在波長326nm處有最大吸收。當在演算催化下加熱，則發(fā)生去水反應而生成脫水維生素A.后者比維生素A多一個共軛雙鍵，使其最大吸收峰紅移，同時在350～390nm波長范圍內(nèi)出現(xiàn)3個最大吸收峰。

　?、郾由V：以硅膠G為吸附劑，環(huán)己烷-乙醚（80：20）為流動相。

　　含量測定：紫外分光光度法（三點校正法）

　　原理：本法是在三個波長處測定吸收度，根據(jù)校正公式計算吸收度A校正值后，再計算含量，故本法亦稱"三點校正法".原理如下：

　?、匐s質的吸收在310～340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大，吸收度變小。

　?、谖镔|對光的吸收具有加和性。

　　三點波長的選擇法①第1點：選擇維生素A的最大吸收波長（即λ1）。

　?、诘?點和第3點：在最大吸收波長的兩側各選一點（即λ2和λ3）。

　　等波長差法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3，使λ3-λ1＝λ1-λ2.維生素A醋酸酯。

　　等吸收法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3，使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1.維生素A醇。

　?、劬S生素A2和維生素A3；維生素A的氧化產(chǎn)物（環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸）；維生素A在光照下產(chǎn)生的無生物活性的聚合物鯨醇；維生素A的異構體；合成時產(chǎn)生的中間體。

　?、軠y定方法：第一法（使用于維生素A醋酸酯）

　　取維生素A醋酸酯，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml中含9～15單位的溶液。然后在300、316、328、340、360nm五個波長處分別測定吸收值，確定最大吸收波長（應為328nm）。計算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸收度的比值。

　　計算：

　　a.求吸收系數(shù)，吸收系數(shù)＝A/cl.b.求效價（U/g），U/g＝吸收系數(shù)×19001900為維生素A醋酸酯在環(huán)己烷溶液中測定的換算因數(shù)。

　　3.求維生素A醋酸酯膠丸為標示量的百分含量。

　　標示量%＝（A×D×1900×W）/（W×100×l×標示量）

　　1U=0.344μg維生素A醋酸酯1U=0.300μg維生素A醇4.A值的選擇法第二法（適用于維生素A醇）

　　說明：

　?、啪S生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程法（即代數(shù)法）推導出來的；維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或成6/7定位法）推倒出來。

　?、圃趹萌c校正法時，除其中一點在最大吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側上升或下降陡部的波長處進行測定。

　　維生素E維生素E（消旋-α-生育酚醋酸酯）有天然片和合成品之分，天然品為右旋體（d-α）；合成品為消旋體（dl-α）。

　　結構：維生素E為苯丙二氫吡喃醇衍生物，苯環(huán)上又一個乙?；姆恿u基，故又稱生育酚。他主要有α、β、γ、δ四種異構體，其中以α異構體的生理作用最強。

　　性質：

　　溶解性：微黃色或黃色透明的粘稠液體，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。

　　具有紫外吸收。

　　在無氧或其它氧化劑存在時，在酸性或堿性溶液中，加熱可水解生成游離生育酚；在有氧或其它氧化劑存在時，則進一步氧化生成醌型化合物。在堿性條件下加熱，這種氧化作用更易發(fā)生。

　　鑒別試驗：

　?、畔跛岱磻喝”酒芳s30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75℃加熱約15min，溶液應顯橙紅色。

　?、扑夂笱趸磻喝”酒芳s10mg，加醇制氫氧化鉀試液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml與乙醚10ml，振搖、靜置使分層，取乙醚液2ml，加2，2'-聯(lián)吡啶的乙醇溶液（0.5→100）數(shù)滴和三氯化鐵的乙醇溶液（0.2→100）數(shù)滴，應顯血紅色。

　　⑶紫外光譜法。

　　⑷薄層色譜法。

　　特殊雜質：

　　游離維生素E.利用游離維生素E的還原性，用硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）滴定，以二苯胺為指示劑，限量為2.15%.含量測定：

　?、艢庀嗌V法：載氣：氮氣；固定相：硅酮（OV-17），涂布于經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子小球上；檢測器：氫火焰離子化檢測器；理論板數(shù)：按維生素E峰計算應不低于500；維生素E與內(nèi)標物質的分離度應大于2.內(nèi)標：正三十二烷。

　?、聘咝б合嗌V法：C18柱；流動相為甲醇：水（49：1）；紫外檢測器；波長292nm.維生素B1結構：維生素B1（鹽酸硫胺）是由氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過央甲基連接而成的季銨化合物，噻唑環(huán)上季銨及嘧啶環(huán)上氨基，為兩個堿性基團，可與酸成鹽。

　　性質：

　　溶解性：本品在水中易溶，水溶液顯酸性反應。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。

　　具有紫外吸收。

　　在堿性中遇氧化劑，如鐵氰化鉀，可被氧化為具有熒光的硫色素，后者溶液正丁醇中呈藍色熒光。

　　分子中含有兩個雜環(huán)，故可與某些生物堿沉淀試劑反應生成組成恒定的沉淀。

　　鑒別試驗⑴硫色素反應方法：取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2min，放置使分層，上面的醇層顯強烈的藍色熒光。加酸使成酸性，熒光即消失。再加堿使成堿性，熒光又顯出。

　　原理：維生素B1在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或異丁醇等）中，顯藍色熒光。

　?、瞥恋矸磻S生素B1與碘化汞生成淡黃色沉淀維生素B1與碘生成紅色沉淀維生素B1與硅鎢酸生成白色沉淀含量測定方法有：硅鎢酸重量法、硫色素熒光法、非水溶液滴定法和紫外分光光度法。

　　中國藥典收載紫外分光光度法維生素C結構：維生素C分子結構中具有二烯醇結構和內(nèi)酯環(huán)，且有二個手性碳原子（C4、C5），因此不僅使維生素C性質極為活潑，且具旋光性。

　　性質：

　　溶解性：維生素C在水中易溶，水溶液呈酸性，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。

　　結構遇糖類相似，也具糖的性質。

　　分子中二烯醇基具極強的還原性，易被氧化為二酮基而成為去氫抗維生素C，加氫又可還原為維生素C.在堿性溶液或強酸性溶液中能進一步水解為二酮古羅糖酸。

　　C3-OH由于受共軛效應的影響，酸性較強；C2-OH的酸性極弱，故維生素C一般表現(xiàn)為一元酸，能與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。

　　分子中有兩個手性碳原子，故有四個光學異構體，其中L（+）-維生素C活性最強。

　　維生素C和碳酸鈉作用可生成單鈉鹽，不致發(fā)生水解，因雙鍵使內(nèi)酯環(huán)變得較穩(wěn)定；但在強堿中，內(nèi)酯環(huán)可水解，生成酮酸鹽。

　　維生素C有共軛雙鍵，在稀礦酸溶液中，在245nm波長處有最大吸收；若在中性或堿性條件下，則紅移至265nm處。

　　鑒別試驗：

　?、排c硝酸反應方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加硝酸銀試液0.5ml，即生成銀的黑色沉淀。

　　原理：維生素C分子中有二烯醇基，具強還原性，可被硝酸銀氧化為去氫維生素C，同時可產(chǎn)生黑色銀沉淀。

　?、婆c2，6-二氯靛酚反應方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加2，6-二氯靛酚試液1～2滴，試液的顏色即消失。

　　原理：2.6-二氯靛酚為一染料，其氧化型在酸性介質中為玫瑰紅色，堿性介質中微藍色。與抗壞血酸作用后生成還原型的物色的酚亞胺。

　　⑶與其它氧化劑反應維生素C還可被亞甲藍、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅試液、磷鉬酸等氧化劑氧化為去氫維生素C，同時，維生素C可使這些試劑褪色，產(chǎn)生沉淀或顯色。

　?、壤镁S生素C具糖類性質的反應維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧，生成戊糖，再失水，轉變?yōu)榭啡尤脒量?，加熱?0℃產(chǎn)生藍色。

　　⑸紫外分光光度法維生素C在0.01mol/L鹽酸液中，在243nm波長處有唯一的最大吸收，利用此特征進行鑒別。

　　含量測定：

　　碘量法：溶劑：水和稀醋酸，指示劑：淀粉。

　　操作中加入稀醋酸10ml使滴定在酸性溶液中進行。在酸性介質中維生素C受空氣中氧的氧化作用減慢，但樣品溶于稀酸后仍需立即進行滴定。

　　加新沸過的冷水液是為了減少水中溶解氧對測定的影響。

　　如片劑，溶解后應濾過，取續(xù)濾液測定；注射液測定時要加2ml丙酮，以消除注射液內(nèi)含有的抗氧劑亞硫酸氫鈉對測定的影響。

　　抗生素類藥物β-內(nèi)酰胺類抗生素本類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族，他們的分子結構中均含有β-內(nèi)酰胺環(huán)。

　　基本結構：

　　分子中都有一個游離羧基和酰胺側鏈。

　　青霉素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)頭孢菌素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán)性質：

　　溶解度：青霉素和頭孢菌素分子中的游離羧基具有相當強的酸性，能與無機堿或某些有機堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機溶劑。

　　旋光性：青霉素族分子中含有三個手性碳原子，頭孢菌素族含有兩個手性碳原子，都具有旋光性。

　　紫外吸收特性青霉素分子中的母核部分無紫外吸收，但出側鏈酰胺基上R如具苯環(huán)共軛系統(tǒng)，則有紫外吸收特性。

　　頭孢菌素由于母核部分具有O-C=N-C=C結構，故有紫外吸收。

　　β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性β-內(nèi)酰胺環(huán)是青霉素族結構最不穩(wěn)定的地方，如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子（銅、鉛、汞和銀）等作用時，易發(fā)生水解和分子重排，導致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去活性。

　　鑒別試驗：

　?、赔?、鈉鹽的火焰反應⑵呈色反應①羥肟酸鐵反應：青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子呈色。

　　頭孢哌酮：紅棕色；氨芐西林：紫紅色；頭孢氨芐：紅褐～褐色；頭孢噻吩鈉：紅褐色；普魯卡因青霉素：紫紅色；頭孢唑啉鈉：紅棕色。

　　②硫酸-硝酸呈色反應：頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應后成色。

　　頭孢噻吩鈉：紅棕色；頭孢氨芐：黃色；頭孢噻肟鈉：亮黃色。

　?、圮崛磻耗承┚哂笑?氨基的本類藥物（如氨芐西林）遇茚三酮即顯藍紫色。

　?、芘c斐林試劑反應：本類藥物具有類似肽鍵結構，可產(chǎn)生雙縮脲反應。開環(huán)分解，使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。

　?、葑兩?硫酸呈色反應：阿莫西林加變色酸-硫酸實際混合后，于150℃加熱2～3min，因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。

　?、夼c重氮苯磺酸呈色反應：頭孢菌素族7位側鏈含有酚羥基基團時，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應，顯橙黃色。

　?、吲c銅鹽呈色：頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色。

　?、浅恋矸磻僭谙∷嶂猩砂咨恋恚呵嗝顾剽浐颓嗝顾剽c加水溶解后，加稀鹽酸2滴，即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中成鹽。

　　②有機胺鹽的特殊反應重氮化-偶合反應：普魯卡因青霉素水溶液酸化后，顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應，生成偶氮染料紅色沉淀。

　　與三硝基苯酚的反應：芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的殘渣含有二芐基乙二胺，加稀乙醇使殘渣溶解，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸結晶。

　?、裙庾V法①紫外分光光度法最大吸收波長鑒定法水解產(chǎn)物的最大吸收波長鑒定法②紅外吸收光譜③核磁共振光譜⑸色譜法①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測定⑴碘量法（芐星青霉素）

　　青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產(chǎn)物消耗碘。

　　反應分兩步進行：第一步反應是按化學計算量進行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應受溫度、pH、時間等諸多因素影響，故耗碘量沒有固定的量關系。因此試驗過程中要嚴格控制溫度，同時采用與青霉素標準品平行對照測定，則可抵消上述可變因素的影響。

　　碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為最好。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘，故本法的靈敏度較高。

　　注意：在滴定終點時放慢滴定速度，并強力振搖；如果滴定至終點又返現(xiàn)藍色，說明真正的終點尚未到達。

　?、乒糠ǎㄇ嗝顾剽c、青霉素鉀）

　　青霉素分子不與汞鹽反應，而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應，根據(jù)消耗的汞鹽量可以計算青霉素的含量。

　　電位滴定法：指示電極：鉑電極；參比電極：汞-硫酸亞汞電極。滴定液：硝酸汞。

　　每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的總青霉素。

　　總青霉素的百分含量與降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。

　　注意：青霉素含量計算以第二次滴定終點為依據(jù)；水解必須完全；空白試驗也要稱取供試品，但不經(jīng)氫氧化鈉水解；與碘量法比較，汞量法測定青霉素的主要優(yōu)點是不需要青霉素標準品作對照，汞鹽滴定液用EDTA標定即可。

　?、撬釅A滴定法（苯唑西林鈉）

　?、茸贤?可見分光光度法⑸高效液相色譜法氨基糖苷類抗生素