風濕病的臨床實踐和實驗室檢查是臨床醫(yī)學檢驗技士考試需要了解的知識點,醫(yī)學教育|網(wǎng)搜集整理了相關(guān)內(nèi)容,希望對廣大復習備考的考生有所幫助。
風濕病的臨床實踐和實驗室檢查:
一、定義
傳統(tǒng)認為抗細胞核內(nèi)成分的抗體稱為抗核抗體(AutoantibodytoNuclearAntigen,ANA),這一概念強調(diào)了細胞核的重要性,因為細胞核內(nèi)有DNA.RNA.堿性組蛋白、非組蛋白、磷脂及各種蛋白酶等復雜的化學組成,決定了ANA存在不同的成分,因此,構(gòu)成了抗核抗體譜(ANAs)。隨著免疫熒光技術(shù)的改進,先進的免疫學技術(shù)的應用和分子生物學的發(fā)展,目前對ANA的理解已不再局限于核成分,而是指抗核酸(nucleicacid)和核蛋白(nucleoprotein)抗體的總稱。故現(xiàn)在對ANA靶抗原的理解已從傳統(tǒng)的細胞核擴大到整個細胞。ANA在許多風濕性疾病,如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、干燥綜合征、類風濕關(guān)節(jié)炎等均可陽性,因此是診斷彌漫性結(jié)締組織病的篩選抗體。健康老年人、感染性疾病和服用某些藥物(普魯卡因酰胺、肼苯噠嗪、苯妥英鈉、異煙肼等)的患者均可有ANA陽性。
1954年Hargrave發(fā)現(xiàn)LE細胞奠定了當今ANAs的基礎(chǔ)。已知LE因子即是ANA,它是一種抗DNA-組蛋白(DNP)復合物的抗體,目前已采用簡易和迅速的抗DNP抗體測定取代LE細胞的檢查醫(yī)`學教育網(wǎng)搜集整理。
二、測定原理和方法
常規(guī)檢測ANA的方法是以鼠肝和鼠腎為底物的間接免疫熒光法。由于某些抗原如SSA/RO、Jo-1、rRNP等在細胞漿內(nèi)比核內(nèi)含量多,因此,鼠肝或鼠腎作底物檢測常呈陰性反應,為彌補這一不足,以核質(zhì)豐富的Hep-2細胞(人喉癌上皮細胞)為底物提高了ANA檢測的陽性率(≥1:40為陽性)。對于ANA陽性的標本,應排除實驗過程中血清洗脫不盡或標有熒光素的抗人免疫球蛋白濃度過高而造成的假陽性。必須強調(diào)指出,待測血清標本一定要稀釋,因為低滴度的ANA可在感染性疾病、腫瘤及正常人中出現(xiàn)。未加稀釋的正常人血清可有1/3的呈陽性ANA反應,但其滴度較低。ANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗必須強調(diào)高滴度。對于ANA陰性的標本,要考慮是否有底物保存不當或操作過程中造成的誤差,抑或藥物治療后病情緩解所致。
ANAS的熒光染色型別有五種。
(1)均質(zhì)型:核質(zhì)染色均勻一致,此型與抗組蛋白抗體和抗DNA抗體有關(guān);
(2)斑點型:核質(zhì)染色呈斑點狀,核膜存在,此型多與可溶性核抗原(ENA)抗體有關(guān);
(3)核仁型:僅核仁著染熒光,與4—6SRNA抗體相關(guān),在硬皮病中較多見;
(4)核周(核膜)型:熒光包繞在核膜周圍,多與抗雙鏈DNA抗體有關(guān);
(5)著絲點型:處于分裂時相的Hep-2細胞為底物可出現(xiàn)依著絲點散在排列的特殊點狀圓形,與斑點型區(qū)別的重要之處在于前者核膜已消失,主要與雷諾現(xiàn)象有相關(guān)性。熒光染色核型可隨血清稀釋的改變而發(fā)生改變,如均質(zhì)型的ANA在血清稀釋后可出現(xiàn)斑點型和核周型。對于ANA陽性的標本,應采用對流電泳法、免疫雙擴散法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)或放射免疫法、免疫印跡法等識別出確切類型,因不同類型的ANA有其不同的臨床意義。