醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)主管技師：《答疑周刊》2015年07期

【問題】化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型及原理？

化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)，是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時(shí)間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項(xiàng)最新免疫測(cè)定技術(shù)。

1化學(xué)發(fā)光免疫分析原理

化學(xué)發(fā)光免疫分析包含兩個(gè)部分,即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化,形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體,當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí),同時(shí)發(fā)射出光子(hM),利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器測(cè)量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)(在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體)直接標(biāo)記在抗原(化學(xué)發(fā)光免疫分析)或抗體(免疫化學(xué)發(fā)光分析)上,或酶作用于發(fā)光底物。

2化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型

化學(xué)發(fā)光免疫分析法以標(biāo)記方法的不同而分為兩種:

(1)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析法。

(2)酶標(biāo)記、以化學(xué)發(fā)光底物作信號(hào)試劑的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法。

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【問題】Coombs試驗(yàn)的配血原理是什么？

凡Coombs試驗(yàn)即抗人球蛋白試驗(yàn)，是檢測(cè)血液中溫反應(yīng)性抗體的一種方法，也是診斷自身免疫性溶血性貧血的重要指標(biāo)。溫抗體中50%以上由IgG介導(dǎo)，其次為IgM，IgA和C3d等，因此本試驗(yàn)應(yīng)分選各種單克隆抗體同時(shí)測(cè)定。Coombs試驗(yàn)分為直接試驗(yàn)（直接反應(yīng)）和間接試驗(yàn)（間接反應(yīng)）：直接試驗(yàn)的目的是檢查紅細(xì)胞表面的不完全抗體；間接試驗(yàn)的目的是檢查血清中存在游離的不完全抗體。

（1）直接coombs試驗(yàn)用于檢測(cè)已粘附在紅細(xì)胞表面的不完全抗體。即將受檢紅細(xì)胞充分洗滌后，將抗球蛋白試劑加入已結(jié)合有抗體的受檢紅細(xì)胞懸液中，即可見細(xì)胞凝集?？捎貌Ｆㄗ龆ㄐ栽囼?yàn)，也可用試管法或微量法做半定量測(cè)定。用于檢測(cè)新生兒溶血癥、自身免疫性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病等。

（2）間接coombs試驗(yàn)用于檢測(cè)游離在血清中的不完全抗體。即將待測(cè)血清標(biāo)本加入具有特異抗原的紅細(xì)胞懸液中，如果抗原抗體相應(yīng)則發(fā)生結(jié)合，再加入抗球蛋白抗體，則出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。本法多用于檢測(cè)母體Rh（D）抗體以及因紅細(xì)胞不相容的輸血而產(chǎn)生的血型抗體。此外也可用專一特異性的抗球蛋白血清，如抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗補(bǔ)體血清等，分析與紅細(xì)胞表面結(jié)合的不完全抗體的Ig亞類。

【問題】肝細(xì)胞性黃疸,血中為什么兩種膽紅素都升高，尿膽原正?；蛏?？

要搞清楚這個(gè)問題，必須先弄清人體的膽紅素代謝過程：

在膽紅素(膽汁成分)的代謝過程中，肝細(xì)胞承擔(dān)著重要任務(wù)。首先是衰老紅細(xì)胞分解形成的間接膽紅素隨血液循環(huán)運(yùn)到肝細(xì)胞表面時(shí)，肝細(xì)胞膜微絨毛將其攝取，進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)，與Y、Z蛋白固定結(jié)合后送至光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，靠其中葡萄醛酸基移換酶的催化作用，使間接膽紅素與葡萄糖醛酸結(jié)合成直接膽紅素(色素I、II混合物)；在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基氏體、溶酶體等參與下直接膽紅素排泄到毛細(xì)膽管中去?？梢姼渭?xì)胞具有攝取、結(jié)合、排泄膽紅素的功能。

當(dāng)患肝炎時(shí)，肝細(xì)胞成為各種病毒侵襲的靶子和復(fù)制繁殖的基地，在機(jī)體免疫的參與下，肝臟大量細(xì)胞功能減退，受損壞死，致部分直接、間接膽紅素返流入血。血液中增高的膽紅素(34.2umol/L)把眼鞏膜和全身皮膚染黃，形成黃疸。

需要知道的是，各種肝炎患者的肝細(xì)胞并不是全部被破壞，健康的肝細(xì)胞會(huì)代償性地“努力工作”，而被破壞的肝細(xì)胞基本上喪失了各種功能，并且還可以將大量的非結(jié)合膽紅素、結(jié)合膽紅素直接釋放入血，造成血液里的總膽紅素、非結(jié)合膽紅素、結(jié)合膽紅素濃度都有升高。

在腸道中生成的尿膽原會(huì)有一部分被吸收入血，經(jīng)門脈入肝。正常情況下這部分尿膽原大多被肝細(xì)胞重新轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合膽紅素，極少量沒被肝細(xì)胞吸收的才會(huì)經(jīng)腎排出，這就是尿中的尿膽原。但肝細(xì)胞受損了，就不能轉(zhuǎn)化尿膽原了，所以從腸道吸收入血的尿膽原幾乎全部要經(jīng)腎排出。這就是為什么腸道產(chǎn)尿膽原少了，尿中尿膽原反而多了。

因此肝細(xì)胞性黃疸：處理障礙。血中兩種膽紅素都升高，尿膽原正常或升高，尿膽紅素陽性。

【臨床血液學(xué)檢驗(yàn)】

紅細(xì)胞數(shù)降低的程度比血紅蛋白更顯著，最可能的診斷是

A.失血

B.再生障礙性貧血

C.巨幼紅細(xì)胞性貧血

D.溶血

E.缺鐵性貧血

【正確答案】C

學(xué)員提問：失血，再生障礙性貧血，缺鐵貧，是怎樣的一個(gè)情況，它的紅細(xì)胞和血紅蛋白會(huì)有怎樣的一個(gè)變化?

解析：再生障礙性貧血呈全血細(xì)胞減少，貧血屬正常細(xì)胞型，亦可呈輕度大紅細(xì)胞。紅細(xì)胞輕度大小不一，但無明顯畸形及多染現(xiàn)象，一般無幼紅細(xì)胞出現(xiàn)。網(wǎng)織紅細(xì)胞顯著減少。

缺鐵性貧血早期或輕度缺鐵可以沒有貧血或僅極輕度貧血。晚期或嚴(yán)重缺鐵有典型的小細(xì)胞低色素型貧血。紅細(xì)胞壓積和血紅蛋白濃度降低的程度通過紅細(xì)胞計(jì)數(shù)減少的程度。還可見很少的靶形、橢圓形或其他不規(guī)則形態(tài)的紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)大多正常，白細(xì)胞計(jì)數(shù)正?；蜉p度減低。血小板計(jì)數(shù)高低不一。

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【臨床血液學(xué)】

紅細(xì)胞G-6-PD酶缺乏時(shí)，下列哪項(xiàng)試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)

A．抗人球蛋白試驗(yàn)

B．熱溶血試驗(yàn)

C．高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)

D．酸溶血試驗(yàn)

E．血紅蛋白電泳出現(xiàn)異常區(qū)帶

【正確答案】C

學(xué)員提問：為什么

解答：紅細(xì)胞G6PD缺陷癥：本病分5型：蠶豆病、藥物致溶貧、感染誘發(fā)溶血、新生兒高膽紅素血癥和遺傳性非球形紅細(xì)胞溶貧。①篩檢試驗(yàn)：高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)：G6PD活性雜合子中等缺乏者74%～31%，臍血77%～41%；純合子或半合子G6PD嚴(yán)重缺乏者大于30%，臍血小于40%。G6PD熒光斑點(diǎn)法：G6PD活性中等缺乏者10～30min出現(xiàn)熒光；嚴(yán)重缺乏者30min不出現(xiàn)熒光。②確診試驗(yàn)：G6PD活性減少。

酸溶血試驗(yàn)是診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥的主要確診試驗(yàn)。

酸溶血試驗(yàn)，又稱Ham試驗(yàn)。指病人紅細(xì)胞與酸化后的血清一起置37℃環(huán)境中作用，紅細(xì)胞發(fā)生破壞，即為陽性。

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【臨床化學(xué)檢驗(yàn)】

關(guān)于細(xì)胞酶的釋放，錯(cuò)誤的是

A．酶蛋白分子量的大?。涸囼?yàn)證明酶釋放的速度和分子量成正比

B．胞質(zhì)中游離的酶如ALT、LD最容易釋放入血

C．非血漿特異的酶在細(xì)胞內(nèi)、外濃度可差千倍以上，只要有少量細(xì)胞受損傷，酶從細(xì)胞中釋出，就可使血液中酶明顯升高

D．血管內(nèi)皮細(xì)胞和血細(xì)胞的酶直接進(jìn)入血液

E．酶大部分進(jìn)入組織間隙后再入血

【正確答案】C

學(xué)員提問：請(qǐng)解釋一下。

解答:細(xì)胞酶的釋放：是疾病時(shí)大多數(shù)血清酶增高的主要機(jī)制，影響細(xì)胞酶釋放的主要原因有：

1）細(xì)胞內(nèi)、外酶濃度的差異：非血漿特異的酶在細(xì)胞內(nèi)、外濃度可差千倍以上，只要有少量細(xì)胞受損傷，酶從細(xì)胞中釋出，就可使血液中酶明顯升高；

2）酶在細(xì)胞內(nèi)的定位和存在的形式：胞質(zhì)中游離的酶如ALT、LD最容易釋放入血，而在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的酶則較難釋放出來，特別是線粒體酶，如肝細(xì)胞中的AST常需細(xì)胞出現(xiàn)壞死病變時(shí)才能釋放入血；

3）酶蛋白分子量的大?。涸囼?yàn)證明酶釋放的速度和分子量成反比。此因素對(duì)酶在血液出現(xiàn)時(shí)間的影響大于對(duì)酶濃度高低的影響，例如LD分子量大于CK，而當(dāng)有心肌梗死時(shí)，LD在血液中升高的時(shí)間就晚于CK。

（3）酶在細(xì)胞外間隙的分布和運(yùn)送：細(xì)胞中酶有三種途徑進(jìn)入血液，即：

1）血管內(nèi)皮細(xì)胞和血細(xì)胞的酶直接進(jìn)入血液；

2）酶可同時(shí)進(jìn)入血液和組織間隙，后者再入血；

3）酶大部分進(jìn)入組織間隙后再入血。

這些因素都會(huì)影響酶進(jìn)入血液的時(shí)間和升高的程度。

（4）血液中酶的清除：不同疾病和不同的酶從血液中清除的時(shí)間和機(jī)制不同，同一疾病不同酶恢復(fù)正常的時(shí)間也不一樣，這和酶的半壽期以及一些其他因素有關(guān)

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