辣根過氧化酶是檢驗(yàn)技師考試的內(nèi)容,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理相關(guān)內(nèi)容供大家參考。
辣根過氧化酶(HRP):HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,純化方法也不復(fù)雜。它是一種糖蛋白,含糖量約l8%;分子量為44kD;是一種復(fù)合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結(jié)合而成的一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為無色糖蛋白,在275nm波長(zhǎng)處有最高吸收峰;輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán),在403nm波長(zhǎng)處有最高吸收峰。HRP對(duì)受氫體的專一性很高,除H202外,僅作用于小分子醇的過氧化物和尿素的過氧化物。后者為固體,作為試劑較H202方便。
許多化合物可 作為HRP的供氧體,在ELISA中常用的供氫體底物為鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和ABTS.OPD為在ELISA中應(yīng)用最多的底物,靈敏度高,比色方便。其缺點(diǎn)是配成應(yīng)用液后穩(wěn)定性差,而且具有致異變性。TMB無此缺點(diǎn)。TMB經(jīng)酶作用后由無色變藍(lán)色,目測(cè)對(duì)比鮮明;加酸停止酶反應(yīng)后變黃色,可在比色計(jì)中定量;因此應(yīng)用日見增多。ABTS,雖然靈敏度不如0PD和TMB,但空白值很低。
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