B細胞具有多種特異性抗原和受體,據(jù)此建立了相應的檢測方法,一般用以研究B細胞各分化發(fā)育階段的特性,也可藉以鑒定和計數(shù)各階段B細胞在人外周血和淋巴樣組織的分布以及疾病時的變化動態(tài),為臨床提供診治相關疾病的有用信息。
1.B細胞表面抗原的檢測:B細胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原,其中有些系全部B細胞所共有,而有些僅活化B細胞所特有,據(jù)此可用相應的CD系列單克隆抗體,通過間接熒光免疫法、酶免疫組化或ABC法加以檢測。
2.SmIg的檢測:大多采用間接熒光免疫法或包括ABC醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理法在內的酶免疫組化法,關鍵是選用高效價、高特異性和高親和力的熒光或酶標記的多價抗人Ig抗體,也可分別用各種類型的Ig,即IgM、IgG、IgA、IgE等抗血清,檢測帶有各種類型Ig的B細胞,在人外周血中以帶有SmIgM的細胞數(shù)為最多。B細胞經熒光標記的抗Ig抗體染色,細胞膜表面呈現(xiàn)的熒光著色可有不同的形式,開始均勻分布呈環(huán)狀,其后集中在某些部位呈斑點狀,然后又可集在一個部位呈帽狀,最后可被吞飲入胞漿直至熒光消失。這一現(xiàn)象是由于淋巴細胞膜由雙層類脂組成,上嵌有蛋白分子,在體溫條件下,膜呈半液體狀,而鑲嵌物能在其中移動。當SmIg抗體發(fā)生結合時,由于抗血清為雙價,使SmIg出現(xiàn)交聯(lián)現(xiàn)象,這種抗原與抗體結合物可連成斑點和帽狀,時間過長,帽狀結合物可脫落或被吞飲而消失,因此染色后,觀察時間不能超過30min,或在染色時加疊氮鈉防止帽狀物形成或被吞飲。