凝膠內(nèi)沉淀試驗是利用可溶性抗原和相應抗體在凝膠內(nèi)擴散，形成濃度梯度，在抗原與抗體濃度比例恰當?shù)奈恢眯纬扇庋劭梢姷某恋砭€或沉淀環(huán)。

　　凝膠支持物的種類：凝膠支持物的種類有瓊脂、瓊脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝膠等。不同分子量的物質(zhì)在凝膠中擴散速度不同，藉此可用以識別不同待測物分子量的差別。

　　1.單向擴散試驗：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴散，如抗原醫(yī)學教育網(wǎng)整理和相應抗體結合，則形成沉淀環(huán)。

　?。?）試管法：將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測抗原在凝膠中自由擴散，在抗原抗體比例恰當位置形成沉淀環(huán)。

　?。?）平板法：是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴散，24～48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測定環(huán)的直徑或面積計算標本中待測抗原的濃度。有兩種計算方法：

　　1）Mancini曲線：適用大分子抗原的和長時間擴散（>48h）的結果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關系c／d2=k。（其中c為抗原濃度，d為沉淀環(huán)直徑，k為常數(shù)）

　　上排為5個不同的參考：中、下排為病人標本，下排右2為一個異常標本（出現(xiàn)明顯擴散環(huán)）

　　2）Fahey曲線：適用于小分子抗原和較短時間擴散的結果處理，用半對數(shù)紙劃線，濃度對數(shù)與擴散環(huán)直徑呈線性關系

　　log c／d=k。

　　（其中c為抗原濃度，d為沉淀環(huán)直徑，k為常數(shù)）

　　單向擴散試驗檢測時的注意點：

　　1）抗血清必須特異性強、效價高、親和力強，在良好條件下保存。

　　2）每次測定都必須作標準曲線。

　　3）每次測定時必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。

　　4）注意雙環(huán)現(xiàn)象（出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分）。

　　5）應用單克隆抗體測量多態(tài)性抗原時，測定值偏低；用多克隆抗體測量單克隆病時，測定值偏高。

　　2.雙向擴散試驗：在瓊脂內(nèi)抗原和抗體各自向?qū)Ψ綌U散，在最恰當?shù)谋壤幮纬煽乖t(yī)學教育網(wǎng)整理抗體沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對比關系，可對抗原或抗體作出定性分析。雙向擴散試驗也分為試管法和平板法。

　?。?）試管法：在含有抗原的溶液和含有抗體瓊脂中間，加一層普通瓊脂，讓下層抗體和上層抗原向中間自由擴散，在抗原、抗體濃度最適時形成沉淀線。

　　（2）平板法：是在瓊脂板上相距3～5mm打一對孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。在相應孔中加入抗原或抗體，待其自由擴散后，抗原、抗體形成可見的沉淀線。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：

　?、倏乖?、抗體是否存在及其相對含量。一般沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大，沉淀線靠近抗體孔，提示抗原量大。

　?、诳乖?、抗體相對分子量的分析；抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴散，其速度受分子量影響。分子量小者，擴散快，反之較慢。由于慢者擴散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。如若兩者分子量相等，則形成直線。

　　見圖22。

　　左側沉淀線抗原分子量大于抗體，右側沉淀線則抗體分子量大于抗原，而中間沉淀線則兩者分子量相等。

　?、劭乖再|(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況；

　　見圖23。

　　左圖：兩種受檢抗原（Ag-a）完全相同，形成一條完全融合沉淀線

　　中圖：左側抗原Ag-ab，右側抗原Ag-ac，兩者都有a決定簇，抗體為雙價，形醫(yī)學教育網(wǎng)整理成部分融合沉淀線，說明兩種抗原有相關成分。

　　右圖：抗體為雙價，抗原Ag-a和Ag-c完全不同。

　?、芸贵w效價的滴定?？贵w效價是抗原、抗體經(jīng)過自由擴散形成沉淀線，出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價。