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免疫原的制備佐劑介紹

2013-10-16 11:57 來(lái)源:
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為了促進(jìn)抗體產(chǎn)生,可在注射抗原的同時(shí),加入一種輔助劑,這種輔助劑稱(chēng)為佐劑。佐劑本身可以有免疫原性,也可不具備免疫原性。常用的有免疫原性的佐劑有百日咳桿菌、革蘭陰性桿菌的內(nèi)毒素和抗酸桿菌(包括結(jié)核分枝桿菌和枯草分枝桿菌)等;非抗原性的佐劑有鋁乳、磷酸鈣、石蠟油、羊毛脂、表面活性劑、藻酸鈣、聚核苷酸、胞壁肽等。應(yīng)用最多的是福氏(Freund)佐劑,是用石蠟油、羊毛脂和卡介苗混合而成。

佐劑的作用機(jī)制極為復(fù)雜。在佐劑-抗原的注射部位,可見(jiàn)到細(xì)胞浸潤(rùn),幾天后,局部形成肉芽腫(細(xì)胞免疫反應(yīng))。起初,反應(yīng)部位以肉芽組織為主,以后則見(jiàn)多量巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨細(xì)胞、類(lèi)上皮細(xì)胞。局部淋巴結(jié)和脾中也可見(jiàn)大量漿細(xì)胞,提示佐劑可以直接刺激參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞并使之增生。有許多佐劑如內(nèi)毒素、分枝桿菌、小棒狀桿菌、聚核苷酸、皂素等對(duì)細(xì)胞膜有活化作用,它們可增加巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的細(xì)胞通透性,促進(jìn)了對(duì)抗原的有效處理。佐劑一般是乳劑或懸液,當(dāng)與水溶液抗原混合后形成一種油包水或水包油的乳狀顆粒,這種顆粒延緩了抗原的吸引,增加了局部刺激作用。

另有報(bào)告,佐劑和抗原混在一起注射可以改變抗原的分布。應(yīng)用核素標(biāo)記的合成多肽或沙門(mén)氏菌鞭毛抗原與福氏佐劑混合注入大鼠或豚鼠后肢足掌,測(cè)定局部引流淋巴結(jié)、脾和血清中的抗原含量,發(fā)現(xiàn)它可明顯地延長(zhǎng)抗原從局部吸收的時(shí)間。對(duì)于低分子量的多肽,這一作用較為短暫,而對(duì)于鞭毛抗原,這一作用十分明顯。雖然吸收被延緩,但在淋巴結(jié)和脾中,抗原的含量都明顯高于不用佐劑的動(dòng)物。這提示,抗原與佐劑同時(shí)應(yīng)用,可促進(jìn)抗原在淋巴組織中存留。

福氏佐劑分為不完全佐劑(石蠟油+羊毛脂)和完全佐劑(石蠟油+羊毛脂+卡介苗)。佐劑和抗原的比例為1:1.由于佐劑是油劑,加入抗原后要充分混合成乳劑?;旌系姆椒ㄓ?種,一為研磨法,二為攪拌混合法醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。研磨法用一乳缽(玻璃或瑪瑙),先將佐劑加熱傾入,待冷卻后加入卡介苗(2~20mg/ml),再逐滴加入抗原,邊滴邊加速研磨,直至完全變?yōu)槿閯橹?。另一種方法是用兩個(gè)5ml注射器,在接針頭處用一尼龍管連通,一個(gè)注射器內(nèi)是佐劑,另一注射器內(nèi)為抗原。裝好后來(lái)回推注,經(jīng)多次混合逐漸變?yōu)槿閯?。本法?yōu)點(diǎn)是無(wú)菌操作,節(jié)省抗原或估劑,用此注射器可直接注射;缺點(diǎn)是不易乳化完全。乳化完全與否的鑒定方法是將一滴乳劑滴入水中,如立即散開(kāi),則未乳化好,如不散開(kāi)漂在水面則為乳化完全。

為了防止感染,有時(shí)在佐劑中加入抗生素。但抗生素有免疫抑制作用,如能注意無(wú)菌操作,就不必加入。

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