透射比濁法的基本原理是測定一定體積的溶液通過的光線量,當(dāng)光線通過時(shí),由于溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物粒子對光線的反射和吸收,引起透射光的減少,測定的光通量和抗原抗體復(fù)合物的量成反比。
(一)原理
抗原抗體在一定緩沖液中形成免疫復(fù)合物(IC),當(dāng)光線透過反應(yīng)溶液時(shí),由于溶液內(nèi)復(fù)合物粒子對光線的反射和吸收,引起透射光減少,免疫復(fù)合物量越多,透射光越少,即光線吸收越多,可用吸光度表示。吸光度和復(fù)合物的量成正比,當(dāng)抗體量固定時(shí),與待檢抗原量成正比。用抗原標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,可測出待檢抗原含量。
原理:選擇一種大小適中,均勻一致的膠乳顆粒,吸附抗體后,當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí),則發(fā)生凝集,單個(gè)膠乳顆粒在入射光波長之內(nèi),光線可透過,當(dāng)兩個(gè)膠乳凝集時(shí),則使透過光減少。這種減少的程度與膠乳凝集成正比,與抗原量成正比。該法敏感度高,試劑穩(wěn)定,因反應(yīng)液中無PEC沉淀劑的影響,個(gè)體IC對結(jié)果影響也小,所以結(jié)果穩(wěn)定、可靠,特異性好;不需特殊儀器設(shè)備,一般分光光度計(jì)、自動化生化分析儀均可使用。
(二)實(shí)驗(yàn)要求
1.溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大,分子太小則阻擋不了光線的通過醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理。
2.溶液中抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量要足夠多,如果數(shù)量太少,溶液濁度變化不大,對光通量的影響不大。
3.透射比濁是依據(jù)溶液中顆粒形成或增加而使透射光減弱的原理來定量檢測抗原,檢測仍需抗原抗體反應(yīng)的溫育時(shí)問,檢測時(shí)間較長。
4.檢測用抗體一般應(yīng)選擇高親和力的抗體,在檢測中要保證抗體過量。應(yīng)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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