核酸檢測方法研究進(jìn)展

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，核酸檢測越來越受到人們的重視并將其與抗原抗體反應(yīng)的高特異性結(jié)合起來形成了免疫PCR技術(shù)。這一技術(shù)具有特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點，可用于單個抗原的檢測。這促進(jìn)了應(yīng)用PCR技術(shù)進(jìn)行HIV核酸檢測的快速發(fā)展。自2001年起[25]，COBAS Ampliscreen HIV? 1 Test等4種HIV核酸檢測技術(shù)通過了FDA的批準(zhǔn)，作為進(jìn)篩選分析技術(shù)來進(jìn)行HIV?1的檢測。最近，實時熒光PCR檢測技術(shù)的應(yīng)用使HIV核酸檢測技術(shù)又進(jìn)入到一個新境界[26]。通過這種技術(shù)，不但可以進(jìn)行定性檢測，更重要的是可以進(jìn)行定量檢測。Barletta等將這一技術(shù)應(yīng)用到HIV的檢測中，大大降低了病毒載量的檢測限(0.66個拷貝相當(dāng)于0.33個病毒粒子)。2002年4月國家藥品監(jiān)督管理局(SDA)批準(zhǔn)了第一個HIV熒光PCR檢測試劑盒。

p24抗原檢測方法研究進(jìn)展

隨著檢測靈敏度不斷提高， p24抗原的檢測逐漸從主要用于在窗口期輔助早期診斷和進(jìn)一步縮短窗口期，發(fā)展到用于病毒載量測定。目前，p24抗原在以下幾方面都有重要應(yīng)用：HIV?1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV?1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；第4代HIV?1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性反應(yīng)，但HIV?1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷；監(jiān)測病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。但現(xiàn)有監(jiān)測病程進(jìn)展和抗病毒治療效果均采用昂貴、操作復(fù)雜的病毒RNA測定方法。我國HIV/AIDS患者絕大部分是在基層，檢測1次病毒載量需要上千元(約1 500元)，很難在基層普及，對疾病的治療和控制很不利。高靈敏度p24 抗原檢測方法的建立成為在發(fā)展中國家使用的病毒載量測定方法的一種選擇。

近幾年，國外對建立高靈敏度檢測p24抗原的研究一直沒有停止，如為了提高檢測血清中p24抗原的敏感性，將血清中免疫復(fù)合物解離后再進(jìn)行測定，發(fā)展了ICD p24抗原測定法。2003年Sutthent[27]等將免疫復(fù)合物熱解離后通過TSA信號放大系統(tǒng)使用ELISA進(jìn)行檢測，使p24抗原檢測的最小檢出值由原來的10 pg/mL降低到0.5 pg/mL，在HIV?1抗體陽性母親所生嬰兒早期的診斷中與RNA檢測相當(dāng)，與HIV核酸檢測具有可比性，具有重要的實用價值。2004年，來自HIV病毒的發(fā)現(xiàn)者之一美國馬里蘭大學(xué)Dr.Robert C.Gallo所領(lǐng)導(dǎo)的實驗室的一篇高靈敏度檢測p24抗原的研究論文引起了廣泛的關(guān)注，p24抗原的檢測成為比病毒核酸檢測更靈敏的方法。2005年來自美國馬里蘭大學(xué)的一篇長篇綜述也開始關(guān)注p24抗原的檢測，認(rèn)為這可以作為低成本、適合在發(fā)展中國家使用的替代現(xiàn)有昂貴的RNA測定方法的一種選擇。

目前，商品化的p24 抗原的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法主要是依據(jù)夾心ELISA原理。該方法是用抗p24抗原的抗體包被固相的雙抗體夾心法，是檢測抗原最為常用的方法，國內(nèi)尚未見商品化的HIV p24抗原檢測試劑的生產(chǎn)。綜上所述，用高靈敏的分析方法診斷艾滋病將有助于實現(xiàn)早期診斷，避免漏檢，有助于對治療艾滋病藥物的療效評價、預(yù)測和監(jiān)測疾病進(jìn)程，提高檢測的靈敏性、縮短窗口期，是HIV診斷方法和診斷試劑持續(xù)發(fā)展的主要方向。

以上簡述了HIV的流行概況和實驗室的檢測技術(shù)，相信隨著HIV實驗室檢測技術(shù)的不斷的改進(jìn)，尤其是核酸檢測技術(shù)的不斷應(yīng)用，HIV檢測的窗口期將會逐步縮短，經(jīng)輸血傳播HIV可能性也將會大大減小。