方法名稱

黃體酮的測定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測定黃體酮的含量。

本方法適用黃體酮。

方法原理

供試品和內(nèi)標(biāo)均制成甲醇溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測黃體酮（C21H30O2）和內(nèi)標(biāo)己烯雌酚的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：

甲醇

儀器設(shè)備：

1． 儀器

1．1 高效液相色譜儀

1．2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按黃體酮峰計(jì)算應(yīng)不低于1000，黃體酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

1．3 紫外吸收檢測器

2． 色譜條件

2．1 流動(dòng)相：甲醇+水= 65 35

2．2 檢測波長：254nm

2．3 柱溫：室溫

試樣制備

1． 稱取供試品

取本品25mg，精密稱定，置25mL量瓶中。

2． 對照品溶液的制備

精密稱取黃體酮對照品適量，加甲醇溶解并稀釋成溶液。

3． 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

取己烯雌酚25mg，置25mL量瓶中，加稀甲醇溶解并稀釋至刻度，即得。

4． 供試品溶液的制備

上述供試品加稀甲醇溶解稀釋至刻度，即得供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述供試品溶液與內(nèi)標(biāo)溶液5mL，置25mL量瓶中，用稀甲醇稀釋至刻度，混合均勻，取5μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定黃體酮和內(nèi)標(biāo)己烯雌酚的吸收值，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

參考文獻(xiàn)：

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p643。