1.抗體瓊脂板的制備同單向擴散法，但注意稀釋液應用pH8.6離子強度0.05M的巴比妥緩沖液。

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3.將用緩沖液稀釋的適宜濃度的參考血清及適當稀釋的抗原（人血清）分別加入各孔中，每孔10或20微升，要求加量準確而不外溢。

4.把加完樣的免疫瓊脂板放入電泳槽中進行電泳，電壓4～6伏/厘米，電泳時間1～5小時，直到大部分抗原孔前端出現(xiàn)頂端尖窄而完全閉合的火箭狀沉淀線，關閉電源。

5.取下瓊脂板，以抗原孔中心為起點，量出各火箭狀沉淀線的高。