毛細管電泳技術介紹:
CE是一項迅速發(fā)展的分離技術醫(yī)學教育網(wǎng)|搜集整理,主要用于生物大分子的分離,如DNA和被十二烷基磺酸鈉 (SDS)飽和的蛋白質(zhì),是在一根內(nèi)徑25~100μm毛細管內(nèi)進行的,毛細管中充入交聯(lián)聚合物,聚合物起到了分子篩的作用,使質(zhì)量電荷比相同的物質(zhì)能夠按照分子由小到大的順序流出,從而實現(xiàn)了分離。分辨率高于高效液相色譜,進樣量只需 1~50nl,在毛細管上開一檢測窗口,直接進行柱上檢測,靈敏度較高,而且樣品前處理非常簡便,適用于大量臨床樣品的分析。CE有多種分離模式,其中毛細管凝膠電泳已越來越廣泛地用于基因診斷、基因治療等臨床分子生物學領域。
毛細管凝膠電泳與傳統(tǒng)的板式或管式凝膠電泳相比,具有以下特點:
(1 )分辨率高,因為毛細管電泳可以施加比板式電泳高 10~100倍的場強,毛細管本身已經(jīng)具有抗對流作用,不必再使用具有抗對流性的凝膠:
(2 )分析速度快;
(3 )定量更加準確,避免了電泳染色時因時間、溫度、染色劑濃度和放置時間不同而產(chǎn)生的誤差;
(4)靈敏度更高,毛細管電泳為柱上檢測,如使用激光誘導熒光檢測器,檢測限可以提高到10-18到10 –21mol/L;
(5)實現(xiàn)自動化操作。能夠進行制備性分離是板式凝膠電泳的優(yōu)點,目前毛細管電泳使用大孔徑毛細管和低場強,只可以進行少量制備,這項技術更適合于臨床實驗室高靈敏度快速分析的要求。
應用CE對PCR產(chǎn)物進行分析可以克服常規(guī)瓊脂糖電泳或聚丙烯酰胺凝膠電泳等方法分析速度慢、操作繁瑣、定量結(jié)果誤差大、自動化程度低的缺點,現(xiàn)已廣泛應用于病原體、腫瘤和遺傳病的基因診斷,如病原體特異基因檢測、基因突變檢測、DNA序列分析等。