抗血清的純化與保存是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師考試可能涉及到的知識(shí)點(diǎn),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了相關(guān)知識(shí)點(diǎn),供考生參考。
抗血清的純化與保存:除抗體外血清中含有多種其他蛋白成分。為了避免這些蛋白質(zhì)干擾抗體(免疫球蛋白)標(biāo)記反應(yīng)和抗原抗體反應(yīng),抗血清可經(jīng)過純化以獲得單一的機(jī)體(常為IgG)組分。常用的純化IgG的方法為飽和硫酸胺鹽析和層析法。蛋白質(zhì)在不同的鹽濃度的溶液中,其溶解度不一樣,鹽離子干擾蛋白質(zhì)和水分子間氫鍵形成,醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理因?yàn)樗?mdash;鹽結(jié)合比水—蛋白質(zhì)結(jié)合更穩(wěn)定,蛋白質(zhì)即可從溶液中沉淀出來。蛋白質(zhì)分子越大,沉淀時(shí)所需鹽離子濃度越低。免疫球蛋白(Mr 1.5×105)比血清中主要蛋白質(zhì)白蛋白(M r 6.7×104)的分子大得多,抗體在30%—50%飽和度的硫酸鹽中析出,而白蛋白需在70%—80%飽和度才析出,因此常用33%飽和度的硫酸胺純化血清中的IgG.鹽析時(shí)為了減少抗體變性,需在4℃進(jìn)行,同時(shí)用pH8.0緩沖液稀釋抗血清,以減少蛋白濃度過高而發(fā)生共沉淀。銨鹽的溶解度不隨溫度變化而明顯改變,0℃和25℃僅差3%,而鈉鹽則相差5倍,因此常在低溫沉淀時(shí)用銨鹽,室溫沉淀用鈉鹽。銨鹽對(duì)抗體的標(biāo)記反應(yīng)(如FITC和biotin標(biāo)記時(shí))有一定的干擾作用。
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