電泳受影響的主要因素
1.電場強度 電場強度也稱電位梯度,它是指單位長度的電位降。電場強度對電泳起重要的作用。電場強度愈大,則帶電粒子的移動愈快。根據(jù)所用電場強度大小,可將電泳分為常壓電泳(100~500V)和高壓電泳(500~10000V)。常壓電泳分離時間長,多用于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì);高壓電泳分離時間短,多用來分離氨基酸、多肽、核酸等小分子物質(zhì)。
2.溶液的pH值 溶液的pH值決定了物質(zhì)的解離程度,也決定了帶電粒子所帶的凈電荷。溶液的pH值離等電點愈遠,則粒子所帶的電荷愈多,電泳速度愈快。在分離某一蛋白質(zhì)混合物時,應選擇適宜pH值,以利于各蛋白質(zhì)組分的分離。為了使溶液pH值在電泳過程中恒定,須使用緩沖溶液。
3.溶液離子強度 離子強度影響粒子的電動電位(ξ電位),不宜過高或過低,一般最適宜的離子強度在0.02~0.2mol/kg。
4.電滲 在電場作用下液體對固體支持物的相對移動稱為電滲。由于電滲現(xiàn)象往往與電泳同時存在,所以帶電粒子的移動同時受電滲影響。醫(yī)學教|育網(wǎng)|收集整理如電泳方向與電滲相反,則實際電泳的距離等于電泳距離減去電滲的距離。在選擇支持物時應注意盡量避免選用高電滲作用的物質(zhì)。
5.其它影響因素 緩沖液的粘度,緩沖液與帶點粒子的相互作用以及電泳時的溫度變化等因素也都影響電泳的速度。
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