酶標(biāo)記抗體或抗原的制備
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標(biāo)記方法應(yīng)符合:技術(shù)方法簡(jiǎn)單、產(chǎn)率高,且重復(fù)性好;標(biāo)記反應(yīng)不影響酶和抗原或抗體的活性;酶標(biāo)志物穩(wěn)定,應(yīng)避免酶、抗體(抗原)以及酶標(biāo)志物各自形成聚合物等。
1.戊二醛交聯(lián)法:同源雙功能交聯(lián)劑。
(1)一步法:連接AP。
①優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便、有效,重復(fù)性好。
②缺點(diǎn):交聯(lián)時(shí)分子間比例不嚴(yán)格,大小不一,影響效果。
(2)二步法:連接HRP。
先將HRP與戊二醛作用,透析除去戊二醛,在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體。
優(yōu)點(diǎn):酶標(biāo)志物質(zhì)量較均一,標(biāo)記效率也較一步法高。
2.改良過碘酸鈉法
HRP標(biāo)記抗體或抗原的最常用方法。
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