酶活性和質(zhì)量測(cè)定方法及評(píng)價(jià)
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酶測(cè)定包括酶量測(cè)定和酶活性測(cè)定。
酶在體液中含量極微,因此臨床上大都采用酶活性測(cè)定,以酶活性間接表示酶量。
酶活性的概念:酶活性指酶催化反應(yīng)的能力即酶促反應(yīng)速度。
反應(yīng)速度是指在規(guī)定條件下單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量。
1.酶活性測(cè)定方法(按反應(yīng)時(shí)間分類)
定時(shí)法(兩點(diǎn)法)
通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開(kāi)始后某一時(shí)間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來(lái)求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開(kāi)始的時(shí)間。
連續(xù)監(jiān)測(cè)法
也稱動(dòng)力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。在酶反應(yīng)過(guò)程中,用儀器監(jiān)測(cè)某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變,通過(guò)計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度,間接計(jì)算酶活性濃度的方法。
2.酶質(zhì)量測(cè)定法
利用酶的抗原性,通過(guò)抗原、抗體反應(yīng)來(lái)直接測(cè)定酶的質(zhì)量,直接用質(zhì)量單位ng/ml、μg/L來(lái)表示酶含量的高低。
酶質(zhì)量測(cè)定的免疫學(xué)方法與測(cè)酶活性方法相比,其優(yōu)點(diǎn)是靈敏度和特異性高,不受體液中其他物質(zhì)的影響,特別是抑制劑和激活劑的影響,當(dāng)血液中有酶抑制劑存在,或因基因缺陷,合成了無(wú)活性的酶蛋白時(shí),可以測(cè)出滅活的酶蛋白量,特別適用于同工酶的測(cè)定。
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