放射免疫分析的實驗方法及測定
放射免疫分析的實驗方法及測定是什么?為了幫助檢驗職稱考生了解,助力檢驗職稱考生復習,醫(yī)學教育網(wǎng)為大家整理如下:
(一)抗原抗體反應
將未標記抗原(標準品和待測樣品)、標記抗原和特異性抗體加入反應試管中,在一定條件(溫度、時間及介質(zhì)pH)下進行競爭抑制反應。
先加待測樣品(或標準品)和抗血清,使非標記抗原與抗體達到結(jié)合平衡,然后再加入標記抗原競爭與抗體結(jié)合。
(二)分離結(jié)合與游離標記物
RIA反應平衡后,標記抗原與試劑抗體形成免疫復合物(B)。由于其含量極少,不能自行沉淀,需加入適當?shù)某恋韯⑵鋸氐壮恋?,然后?jīng)離心使其與游離的標記抗原(F)分離。某些小分子抗原,也可采用吸附法分離B與F。
理想的分離方法應分離徹底、迅速;分離試劑和過程不影響反應平衡,而且效果不受反應介質(zhì)因素的影響;操作應簡單、重復性好以及經(jīng)濟。方法:
1.第二抗體沉淀法:反應完成后加入二抗形成復合沉淀。為增強效果可加入一定量的與一抗同種動物的血清或IgG,或是將二抗與某些顆粒固相物連接。
2.聚乙二醇(PEG)沉淀法:能非特異地沉淀抗原抗體復合物等大分子蛋白質(zhì),而不沉淀小分子抗原。當溫度髙于30℃時,沉淀物易復溶。
3.PR試劑法 先將二抗與PEG按一定比例混合成懸液后進行試驗。此法保留了二者的優(yōu)點,節(jié)省了二者的用量,且分離迅速,簡便。
4.活性炭吸附法:活性炭可吸附小分子游離抗原或半抗原,而大分子蛋白(如抗體和免疫復合物)則留在溶液中。
(三)放射性測量及數(shù)據(jù)處理
分離B、F后,可分別對二者進行測定。
繪制標準曲線(劑量-反應曲線),樣品管以其測量或計算的反應參數(shù),通過標準曲線即可查出相應的待檢抗原濃度。
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