酶活性和質(zhì)量測定方法及其評價是什么?
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酶測定包括酶量測定和酶活性測定。
酶在體液中含量極微,因此臨床上大都采用酶活性測定,以酶活性間接表示酶量。
酶活性的概念:酶活性指酶催化反應(yīng)的能力即酶促反應(yīng)速度。
反應(yīng)速度是指在規(guī)定條件下單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量。
1.酶活性測定方法(按反應(yīng)時間分類)
定時法(兩點法)
通過測定酶反應(yīng)開始后某一時間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時間。
連續(xù)監(jiān)測法
也稱動力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。在酶反應(yīng)過程中,用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變,通過計算求出酶反應(yīng)初速度,間接計算酶活性濃度的方法。
2.酶質(zhì)量測定法
利用酶的抗原性,通過抗原、抗體反應(yīng)來直接測定酶的質(zhì)量,直接用質(zhì)量單位ng/ml、μg/L來表示酶含量的高低。
酶質(zhì)量測定的免疫學(xué)方法與測酶活性方法相比,其優(yōu)點是靈敏度和特異性高,不受體液中其他物質(zhì)的影響,特別是抑制劑和激活劑的影響,當(dāng)血液中有酶抑制劑存在,或因基因缺陷,合成了無活性的酶蛋白時,可以測出滅活的酶蛋白量,特別適用于同工酶的測定。
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