必看知識(shí)點(diǎn):熒光物質(zhì)常見(jiàn)考點(diǎn)小結(jié)
熒光物質(zhì)是檢驗(yàn)職稱(chēng)考試會(huì)涉及的內(nèi)容,為了幫助各位考生了解,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家搜集整理如下:
熒光物質(zhì)
(一)熒光色素
許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱(chēng)為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有:
1.異硫氰酸熒光素(FITC) 為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,易溶于水或乙醇等溶劑。分子量為389.4kD,最大吸收光波長(zhǎng)為490~495nm,最大發(fā)射光波長(zhǎng)為520~530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。其主要優(yōu)點(diǎn)是:①人眼對(duì)黃綠色較為敏感;②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色熒光。
2.四乙基羅丹明(RB200) 為橘紅色粉末,不溶于水,易溶于乙醇和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定,可長(zhǎng)期保存。最大吸收光波長(zhǎng)為570nm,最大發(fā)射光波長(zhǎng)為595~600nm,呈橘紅色熒光。
3.四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC) 最大吸引光波長(zhǎng)為550nm,最大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm,呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對(duì)比鮮明,可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合,但熒光效率較低。
4.藻紅蛋白(R-RE) 本品為無(wú)定形,褐紅色粉末,不溶于水,易溶于乙醇和丙酮,性質(zhì)穩(wěn)定,可長(zhǎng)期保存。最大吸引光波長(zhǎng)為565nm,最大發(fā)射光波長(zhǎng)為578nm,呈明亮的橙色熒光。與FITC的翠綠色熒光對(duì)比鮮明,故被廣泛用于對(duì)比染色或用于兩種不同顏色的熒光抗體的雙重染色。
(二)其他熒光物質(zhì)
1.鑭系螯合物 某些三價(jià)稀土鑭系元素如銪(Eu3+)、鋱(Tb3+)、鈰(Ce3+)等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光,其中以Eu3+應(yīng)用最廣。Eu3+螯合物的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬,發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄,熒光衰變時(shí)間長(zhǎng),最適合用于時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定。
2.酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì) 某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng),一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷,受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮,后者可發(fā)出熒光,激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm,發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性磷酸酶的底物是4-甲基傘酮磷酸鹽,辣根過(guò)氧化物酶的底物是對(duì)羥基苯乙酸等。
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