掌握青霉素鈉、氨節(jié)西林和頭孢羥氨芐的鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法；

　　青霉素v鉀及其片劑的鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法。

　　掌握硫酸鏈霉素、硫酸慶大霉素的鑒別、檢查和含量測(cè)定方法。

　　熟悉羅紅霉素的鑒別、檢查和含量測(cè)定方法。

　　熟悉鹽酸美他環(huán)素的鑒別、檢查和含量測(cè)定方法。

　　第一節(jié) 概述

　　抗生素類藥物種類繁多，性質(zhì)復(fù)雜。

　　來源：多數(shù)生物合成（發(fā)酵），少數(shù)化學(xué)合成或半合成制得。

　　特點(diǎn)：生產(chǎn)技術(shù)復(fù)雜、不易控制，異物污染可能性較大（雖經(jīng)精制提純，仍常含有雜質(zhì)）；多數(shù)不穩(wěn)定，分解產(chǎn)物帶入，使降低、無效或有毒性。

　　各國藥典均制定了"性狀、鑒別、檢查及含量測(cè)定（效價(jià)測(cè)定）"

　　檢查項(xiàng)下，除"水分、溶液的澄清度與顏色、酸堿度、乙醇中不溶物、硫酸鹽、熾灼殘?jiān)⒅亟饘?外，還規(guī)定"異常毒性、熱原、降壓物質(zhì)、無菌"等，此外，還規(guī)定"結(jié)晶性、抽針試驗(yàn)、懸浮時(shí)間與抽針試驗(yàn)、吸碘物質(zhì)" 等。

　　效價(jià)測(cè)定方法生物學(xué)法和化學(xué)及物理化學(xué)法兩大類：

　　生物學(xué)方法：是以抗生素對(duì)細(xì)菌的效應(yīng)（抑制細(xì)菌生長或殺菌力）作為衡量效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)。優(yōu)點(diǎn)：原理和臨床使用的要求一致，更能夠確定抗生素的醫(yī)療價(jià)值，方法 靈敏度高，純度要求低，適用與已知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素，同一類不需分離，可一次測(cè)定總效價(jià)。缺點(diǎn)：操作步驟多、測(cè)定時(shí)間長，誤差大。

　　化學(xué)及物理化學(xué)法：是利用其特有的化學(xué)和物理化學(xué)性質(zhì)及反應(yīng)而進(jìn)行測(cè)定。適用于提純的及化學(xué)結(jié)構(gòu)已確定的抗生素，迅速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)。缺點(diǎn)：雜質(zhì)往往有相同的結(jié)構(gòu)，對(duì)純度要求高，一類抗生素的共同結(jié)構(gòu)反應(yīng)時(shí)，所得結(jié)果，只能代表藥物總的含量，不代表生物效價(jià)。

　　通常理化方法要求：正確可靠、專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、試劑易得、樣品用量少、測(cè)定結(jié)果與生物效價(jià)一致。

　　各國藥典所載的理化方法測(cè)定的抗生素有：β-內(nèi)酰胺類、氯霉素類、及灰黃霉素等，其中hplc法應(yīng)用越來越廣。

　　第二節(jié) β-內(nèi)酰胺類抗生素

　　青霉素族和頭孢菌素族，分子中均含有β-內(nèi)酰胺環(huán)，統(tǒng)稱β-內(nèi)酰胺類。

　　1.化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

　?。ㄒ唬┗瘜W(xué)結(jié)構(gòu) 游離羧基和酰胺側(cè)鏈。氫化噻唑環(huán)或氫化噻嗪環(huán)與β-內(nèi)酰胺類合并的雜環(huán)，分別構(gòu)成二者的母核。青霉素族中的母核稱為6-氨基青霉烷酸（簡(jiǎn)稱6-apa）；頭孢菌素族中的母核為7-氨基頭孢菌烷酸（簡(jiǎn)稱7-aca）。

　　青霉素分子中含有3個(gè)手性碳原子（C3、C5、C6），頭孢菌素分子中含有2個(gè)手性碳原子（c6、c7）。由于酰胺基上r和r1不同，構(gòu)成不同的青霉素族和頭孢菌素族藥物，見表。

　?。ǘ┬再|(zhì)

　　1.酸性：游離羧基酸性（大多青霉素的pka在2.5~2.8），能與無機(jī)堿或某些有機(jī)堿成鹽；

　　2.溶解性：鹽溶于水、有機(jī)堿鹽易溶于甲醇等有機(jī)溶劑，鹽遇酸析出白色沉淀；

　　3.旋光性：

　　4.紫外吸收特征：

　　青霉素母核無吸收，取代基有，如青霉素鉀芐基，水溶液中在264nm波長處有最大吸收；

　　頭孢菌素族由于母核有o=c-n-c=c結(jié)構(gòu)，故有紫外吸收，如頭孢氨芐的水溶液在262nm處，頭孢唑林鈉在272nm處有最大吸收；

　　5.β-內(nèi)酰胺環(huán)的穩(wěn)定：干燥條件下穩(wěn)定。室溫，3年以上；60℃，6周；150℃，1.5h.水溶液在ph6~6.8時(shí)較穩(wěn)定。

　　遇酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子（銅、鉛、汞和銀）等作用，易發(fā)生水解和分子重排，導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去抗菌活性，一系列降解產(chǎn)物為青霉噻唑酸、青霉酸、青霉醛、青霉胺、α-青霉噻唑?；u胺酸和青霉稀酸等。

　　頭孢菌素族：干燥條件下穩(wěn)定。室溫，3年以上；水溶液于25℃，24h失活性8%，酸、堿介質(zhì)、β-內(nèi)酰胺酶、胺類（氨、氨基酸、羥胺等）均能使本品降解。

　　（三）鑒別試驗(yàn)

　　1.鉀、鈉鹽的火焰反應(yīng)

　　2.呈色反應(yīng)

　　1）羥肟酸鐵反應(yīng) 在堿性中與羥胺作用，β-內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)生成羥肟酸，在稀酸中與高價(jià)鐵離子呈色。

　　2）硫酸-硝酸呈色反應(yīng) 頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應(yīng)后呈色，機(jī)理不清，但可區(qū)別。

　　3）茚三酮反應(yīng) α-氨基的本類藥物，氨芐西林，藍(lán)紫色；［醫(yī)學(xué) 教育網(wǎng) 搜集整 理］

　　4）與斐林試劑反應(yīng) 類似肽鍵（-conh-）結(jié)構(gòu)，可產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)。開環(huán)分解使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。中國藥典（95版）收載阿莫西林、氨芐西林鈉采用本法鑒別；

　　5）變色酸-硫酸呈色反應(yīng)95版藥典，阿莫西林加變色酸硫酸試劑混合后，于150℃加熱2~3min，因分解出甲醛與變色酸縮合而呈深褐色；

　　6）與重氮苯磺酸呈色反應(yīng) 頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有-c6h5-oh基團(tuán)時(shí)，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應(yīng)，顯橙黃色；

　　7）與銅鹽呈色 頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色，用于區(qū)別。

　　3.沉淀反應(yīng)

　　1）稀鹽酸中生成白色沉淀 此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸（與酰胺基成鹽）中溶解；

　　2）有機(jī)胺鹽的特殊反應(yīng)

　　3）重氮化-偶合反應(yīng) 普魯卡因青霉素生成偶氮染料紅色沉淀；

　　4）與三硝基苯酚的反應(yīng) 芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后，乙醚提取，蒸去乙醚后的殘?jiān)卸S基乙二胺，加稀醇使殘?jiān)芙?，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸鹽結(jié)晶。

　　4.光譜法

　　1）紫外分光光度法（uv）

　?。?）最大吸收波長鑒定法

　　（2）水解產(chǎn)物的最大吸收波長鑒定法

　　2）紅外吸收光譜法（ir）各國藥典β-內(nèi)酰胺類抗生素幾乎均采用本法鑒定

　　3）核磁共振光譜法（nmr）

　　4）色譜法

　?。?）薄層色譜法（tlc） 本法被各國藥典采用；

　　（2）高效液相色譜法（hplc）主峰的保留時(shí)間一致；

　?。ㄋ模┖繙y(cè)定

　　藥典收載方法，如hplc、碘量法、汞量法、酸堿滴定法、可見紫外分光光度法等

　　1.碘量法

　　降解產(chǎn)物消耗碘

　　水解

　　氧化反應(yīng)

　　未經(jīng)水解的樣品作空白校正。

　　2.汞量法：降解產(chǎn)物與汞反應(yīng)

　　3.酸堿滴定法：可被堿水解，大量完成

　　4.可見-紫外分光光度法

　　1）酸水解法（銅鹽法）

　　2）硫酸汞鹽法

　　3）羥肟酸比色法

　　5.高效液相色譜法

　　較好的分離供試品中可能存在的降解產(chǎn)物、未除凈的原料及中間體等雜質(zhì)而準(zhǔn)確定量。

　　中國藥典收載的頭孢唑林鈉含量測(cè)定方法如下：

　　1.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸氫二鈉、枸櫞酸溶液（取無水磷酸氫二鈉1.33g與枸櫞酸1.12g，加水溶解 并稀釋成1000ml）-乙腈（88：12）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為254nm；頭孢唑林的保留時(shí)間約為7.5min.頭孢唑林峰與內(nèi)標(biāo)峰的分離度應(yīng)大于 4，重復(fù)進(jìn)樣，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（rsd）應(yīng)小于2.0%.

　　2.內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精取乙酰苯胺27mg，置100ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

　　3.測(cè)定法 取本品約50mg，精密稱定，置100ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻；取10μl注入液相色譜儀；另取頭孢唑林對(duì)照品約 50mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（PH7.0）5ml溶解后，再用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶 中，同法測(cè)定；按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算供試品中CL4h14n8o4s3的含量。

　　4.計(jì)算 按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算。

　　第三節(jié) 氨基糖甙類抗生素

　　以堿性環(huán)己多元醇為甙元，與氨基縮合成的甙，故稱為氨基糖甙類抗生素，主要有鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、新霉素及巴龍霉素等，以慶大霉素和鏈霉素為例討論

　?。ㄒ唬╂溍顾豠

　　1.結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 鏈霉素的結(jié)構(gòu)為一分子鏈霉胍和鏈霉雙糖胺結(jié)合而成的堿性甙。其中鏈霉雙糖胺是由鏈霉糖與n-甲基-l-葡萄糖胺　所組成。鏈霉胍和鏈霉雙 糖胺間的甙鍵結(jié)合較弱，鏈霉糖與n-甲基-l-葡萄糖胺間的甙鍵結(jié)合較牢。3個(gè)堿性中心，鏈霉胍上的堿性強(qiáng)（pka = 11.5），葡萄糖胺上的甲氨基 （pka = 7.7），可與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成可溶于水的鹽，臨床常用其硫酸鹽。［醫(yī)學(xué)教 育網(wǎng) 搜集整理］

　　2.性質(zhì) 硫酸鹽易溶于水，難溶于乙醇、氯仿。

　　在PH5~7.5 最為穩(wěn)定，過酸或過堿易水解失效。水解，鏈霉糖可重排為麥牙酚，為鏈霉素特有，可用于鑒別，鏈霉素在230nm處有紫外吸收。

　　3.鑒別試驗(yàn)（1）茚三酮反應(yīng)； （2）n-甲基葡萄糖胺反應(yīng)； （3）麥芽酚反應(yīng)

　　4.檢查

　　5.含量測(cè)定

　?。ǘc大霉素

　　1.結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

　　2.鑒別試驗(yàn)（a）茚三酮反應(yīng)； （b） n-甲基葡萄糖胺反應(yīng)； （c）紫外光譜法； （d）tlc法

　　3.慶大霉素c組分的測(cè)定方法：

　　第三節(jié) 四環(huán)素類抗生素

　　1.化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

　　2.鑒別試驗(yàn)（a）濃H2SO4反應(yīng)； （b）FeCl3反應(yīng)； （c）熒光法；

　　3.鹽酸四環(huán)素中特殊雜質(zhì)檢查

　　4.含量測(cè)定

　　小結(jié)

　　1、β-內(nèi)酰胺類抗生素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，鑒別試驗(yàn)，含量測(cè)定方法。

　?。?）鑒別：（a）羥肟酸鐵反應(yīng)；

　?。╞）焰色反應(yīng)（鹽類）；

　　（c）硫酸及硫酸-甲醛反應(yīng)；

　?。╠）紫外光譜

　　（e）紅外光譜。

　?。?）含量測(cè)定：碘量法及HPLC法。

　　2、鏈霉素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，鑒別試驗(yàn)。 鑒別之

　　（1）茚三酮反應(yīng)；

　　（2）n-甲基葡萄糖胺反應(yīng)；

　　（3）麥芽酚反應(yīng)

　　3、慶大霉素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，鑒別試驗(yàn)，慶大霉素c組分的測(cè)定方法：

　?。?）鑒別：

　?。╝）茚三酮反應(yīng)；

　?。╞） n-甲基葡萄糖胺反應(yīng)；

　?。╟）紫外光譜法；

　?。╠）TLc法

　?。?）慶大霉素c組分：為什么《中國藥典》要規(guī)定控制c組分，用什么方法？

　　4、四環(huán)素類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，鑒別試驗(yàn)，雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法：

　　（1）鑒別：

　?。╝）濃H2SO4反應(yīng)；

　?。╞）FeCl3反應(yīng)；

　?。╟）熒光法；

　　（2）含量測(cè)定：